轉(zhuǎn)錄因子dna結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)分析dns-氨基酸的雙向聚酰胺薄-wenkub
2022-10-09 09:31:40 本頁(yè)面
【正文】 分離血紅蛋白 與魚精蛋白 ? DNA親和層析分離目標(biāo)轉(zhuǎn)錄因子蛋白 綜合性設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn) 4 此實(shí)驗(yàn)共包括如下三個(gè)部分 1. 第一部分，轉(zhuǎn)錄因子 DNA結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)分析 2. 第二部分， DNS氨基酸 的雙向聚酰胺薄膜層析 、凝膠層析分離血紅蛋白 與魚精蛋白 3. 第三部分， DNA親和層析分離目標(biāo)轉(zhuǎn)錄因子蛋白 第一部分，轉(zhuǎn)錄因子 DNA結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)分析 ? 基因表達(dá)的調(diào)控關(guān)鍵在于轉(zhuǎn)錄起始水平的調(diào)控。他將植物葉子的色素通過(guò)裝填有吸附劑的柱子，各種色素以不同的速率流動(dòng)后形成不同的色帶而被分開，由此得名為“色譜法”（ Chromatography) 。 ? 1944年出現(xiàn)紙層析以后，層析法不斷發(fā)展，相繼出現(xiàn)薄層層析、親和層析、凝膠層析、氣相層析、高壓液相層析等。在柱層析中一般稱為洗脫劑，薄層層析時(shí)稱為展層劑。以吸附劑為固定相，根據(jù)待分離物與吸附劑之間吸附力不同而達(dá)到分離目的的一種層析技術(shù)稱為吸附層析。 ? 親和層析是利用生物分子間所具有的專一性親和力的層析技術(shù)。 薄層層析 將適當(dāng)粘度的固定相均勻涂鋪在薄板上，點(diǎn)樣后用流動(dòng)相展開，使各組份分離 薄層層析主要適用于小分子物質(zhì)的快速檢測(cè)分析和少量分離制備，通常為一次性使用。 分配層析技術(shù) （液 液層析法） ? 原理：利用混合物在兩種不相混溶的液相（固定相和流動(dòng)相）之間的分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離各組分的目的。 ? 分配系數(shù)主要與下列因素有關(guān)： ① 被分離物質(zhì)本身的性質(zhì)； ② 固定相和流動(dòng)相的性質(zhì)； ③ 層析柱的溫度。 ? 物質(zhì)在一定溶劑中的分配系數(shù)是一定的， Rf值也是恒定的，因此可以根據(jù) Rf值來(lái)鑒定被分離的物質(zhì)。 ? 親和層析可用于純化生物大分子、稀釋液的濃縮、不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的貯藏、從純化的分子中出去殘余的污染物、用免疫吸附劑吸附純化對(duì)此尚無(wú)互補(bǔ)配體的生物大分子，分離核酸是親和層析應(yīng)用的重要方面。 親和層析示意圖 離子交換層析 ? 離子交換層析是依據(jù)各種離子或離子化合物與離子交換劑的結(jié)合力不同而進(jìn)行分離純化。電荷基團(tuán)與高分子聚合物共價(jià)結(jié)合，形成一個(gè)帶電的可進(jìn)行離子交換的基團(tuán)。 ? 原理：凝膠顆粒內(nèi)部具有多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，被分離的混合物流過(guò)層析柱時(shí)，比凝膠孔徑大的分子不能進(jìn)入凝膠孔內(nèi)，在凝膠顆粒之間的空隙向下移動(dòng)，并最先被洗脫出來(lái)；比網(wǎng)孔小的分子能不同程度的自由出入凝膠孔內(nèi)外，在柱內(nèi)經(jīng)過(guò)的路程較長(zhǎng)移動(dòng)速度較慢，最后被洗脫出來(lái)。 ? 內(nèi)水體積是指凝膠顆粒中孔穴的體積，凝膠層析中固定相體積就是指內(nèi)水體積。我們?cè)O(shè)柱床體積為 Vt，外水體積為 Vo，內(nèi)水體積為 Vi，基質(zhì)體積為 Vg，則有： Vt＝ Vo＋ Vi＋ Vg 由于 Vg相對(duì)很小，可以忽略不計(jì)，則有： Vt＝ Vo＋ Vi 凝膠層析柱各種體積示意圖（陰影部分） 外水體積（ V0） 內(nèi)水體積（ Vi） 基質(zhì)體積（ Vg） 柱床體積 （ Vt） ? 當(dāng)分
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