【正文】 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)及別離(fēnl237。)純化,第一頁，共一百一十三頁。,第一節(jié) 蛋白質(zhì)的理化(lǐhu224。)性質(zhì),第二節(jié) 蛋白質(zhì)的別離(fēnl237。)純化,第三節(jié) 蛋白質(zhì)的分子量測定(c232。d236。ng),第四節(jié) 蛋白質(zhì)的含量測定與純度鑒定,第二頁，共一百一十三頁。,第一節(jié) 蛋白質(zhì)的理化(lǐhu224。)性質(zhì),一、蛋白質(zhì)的酸堿性質(zhì)(x236。ngzh236。),二、蛋白質(zhì)的紫外吸收(xīshōu)性質(zhì),四、蛋白質(zhì)的變性和復(fù)性,五、蛋白質(zhì)的呈色反響,三、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)和沉淀,第三頁，共一百一十三頁。,一、蛋白質(zhì)的酸堿性質(zhì)(x236。ngzh236。),蛋白質(zhì)由氨基酸組成(zǔ ch233。nɡ),且保存著游離的末端?氨基和?羧基以及側(cè)鏈上的各種功能團。因此有些理化性質(zhì)與氨基酸相同。 蛋白質(zhì)也是一類兩性電解質(zhì),能和酸或堿發(fā)生作用。 可解離基團主要來自側(cè)鏈上的功能團。 如果是綴合蛋白質(zhì),那么還有輔基成分所包含的可解離基團。,第四頁，共一百一十三頁。,一、蛋白質(zhì)的酸堿性質(zhì)(x236。ngzh236。),在某pH時蛋白質(zhì)所帶正電荷與負電荷恰好(qi224。hǎo)相等，即蛋白質(zhì)的凈電荷為零時的pH稱等電點〔pI〕。,沒有其他鹽類干擾(gānrǎo)時, 蛋白質(zhì)質(zhì)子供體基團解離出來的質(zhì)子數(shù)與質(zhì)子受體基團結(jié)合的質(zhì)子數(shù)相等時的pH稱為等離子點。,蛋白質(zhì)等電點：,蛋白質(zhì)等離子點：,第五頁，共一百一十三頁。,二、蛋白質(zhì)的紫外吸收(xīshōu)性質(zhì),蛋白質(zhì)溶液能吸收一定波長的紫外光，主要是由帶芳香(fāngxiāng)環(huán)的氨基酸決定的。其在280nm處對紫外吸收能力的強弱順序為：,色〔 Trp 〕 酪〔 Tyr 〕 苯丙〔 Phe 〕,第六頁，共一百一十三頁。,三、蛋白質(zhì)的膠體(jiāo tǐ)性質(zhì)和沉淀,蛋白質(zhì)的分子(fēnzǐ)大小屬于膠體質(zhì)點的范圍。蛋白質(zhì)溶液是一種穩(wěn)定的親水膠體〔具有水化層和雙電子層〕。,蛋白質(zhì)溶液具有膠體的一般性質(zhì)：布朗運動、丁達爾效應(yīng)(xi224。oy236。ng)以及不能通過半透膜。,半透膜：多是由用賽咯吩〔cellophane〕制造，賽咯吩膜是半通透的膜，蛋白質(zhì)等大分子不能透過膜，但小分子可以透過。,〔一〕蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì),第七頁，共一百一十三頁。,〔二〕蛋白質(zhì)的沉淀(ch233。ndi224。n),蛋白質(zhì)在溶液中的穩(wěn)定性是有條件的、相對的。如果條件發(fā)生改變,破壞了蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,蛋白質(zhì)就會從溶液中沉淀出來。 蛋白質(zhì)溶液的穩(wěn)定性與質(zhì)點(zh236。diǎn)大小、電荷和水化作用有關(guān),那么任何影響這些條件的因素都會影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。,沉淀蛋白質(zhì)的方法有以下幾種(jǐ zhǒnɡ): 中性鹽沉淀法、有機溶劑沉淀法、重金屬鹽沉淀法、生物堿試劑和某些酸類沉淀法、加熱變性沉淀法.,第八頁，共一百一十三頁。,鹽析：向蛋白質(zhì)溶液中參加大量的中性鹽(如：硫酸銨,硫酸鈉或氯化鈉等),使蛋白質(zhì)外表(biǎomi224。n)的電荷被中和，蛋白質(zhì)分子脫去水化層而聚集沉淀。,1.中性鹽沉淀法〔鹽析(y225。n xī)法〕,注意(zh249。 y236。)： 鹽析一般不引起蛋白質(zhì)變性。當(dāng)除去鹽后,蛋白質(zhì)又可溶解。,第九頁，共一百一十三頁。,2. 有機溶劑沉淀法,向蛋白質(zhì)溶液中參加一定量的極性有機溶劑(如甲醇,乙醇或丙酮等) 引起蛋白質(zhì)脫去水化層以及降低介電常數(shù)而增加帶電質(zhì)點間的相互作用，致使蛋白質(zhì)顆粒容易凝聚(n237。ngj249。)而沉淀。,第十頁，共一百一十三頁。,3. 重金屬鹽沉淀法,當(dāng)溶液pH大于等電點〔pI〕時,蛋白質(zhì)顆粒帶負電荷，這樣它就容易(r243。ngy236。)與重金屬離子(Hg2+,Pb2+,Cu2+,Ag+等)結(jié)合成不溶性鹽而沉淀。,應(yīng)用 ：誤服重金屬鹽的病人可口服大量牛乳或豆?jié){(d242。ujiāng)等蛋白質(zhì)進行解救,然后再服用催吐劑排出體外。,第十一頁，共一百一十三頁。,4. 生物堿試劑(sh236。j236。)和某些酸類沉淀法,生物堿試劑是指能引起生物堿沉淀的一類試劑： 如：鞣酸〔單寧酸,tannic acid) 鎢酸(tungstic acid，H2WO4)、苦味酸(picric acid)即2,4,6三硝基酚, 碘化鉀等。 某些酸類: 三氯醋酸(c249。 suān), 磺基水楊酸〔sulfosalicylic acid〕和硝酸等.,第十二頁，共一百一十三頁。,5. 加熱(jiā r232。)變性沉淀法,幾乎所有的蛋白質(zhì)都因加熱(jiā r232。)變性而凝固。 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)處于等電點時,加熱凝固最完全和最迅速。,加熱變性引起蛋白質(zhì)凝固的原因： 可能是由于熱變性使蛋白質(zhì)天然結(jié)構(gòu)解體，疏水基外露，因而破壞了水化層，同時由于蛋白質(zhì)處于等電點也破壞了帶電(d224。i di224。n)狀態(tài)。,第十三頁，共一百一十三頁。,蛋白質(zhì)沉淀(ch233。ndi224。n)的應(yīng)用〔制作豆腐〕,制作方法： 將大豆或豆餅加水浸泡后磨漿，過濾，加水煮沸，再加蛋白(d224。nb225。i)沉淀劑(鹽鹵或石膏)使蛋白質(zhì)凝固沉淀，然后加壓去水而成。,第十四頁，共一百一十三頁。,四、蛋白質(zhì)的變性(bi224。nx236。ng)和復(fù)性,蛋白質(zhì)變性的定義： 環(huán)境的變化或是化學(xué)處理都會引起(yǐnqǐ)蛋白質(zhì)天然構(gòu)象的破壞，并伴隨著生物活性的喪失、溶解度的降低以及其它理化常數(shù)的改變，這一過程稱為蛋白質(zhì)變性。,蛋白質(zhì)的復(fù)性： 蛋白質(zhì)的復(fù)性當(dāng)變性因素除去后，變性蛋白質(zhì)又重新回復(fù)到天然構(gòu)象(ɡ242。u xi224。nɡ)的現(xiàn)象成為蛋白質(zhì)的復(fù)性。,第十五頁，共一百一十三頁。,茚三酮反響〔ninhydrin reaction)： 蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生(chǎnshēng)的氨基酸也可以與茚三酮發(fā)生反響呈現(xiàn)藍色。,雙縮脲反響 (biuret reaction)： 蛋白質(zhì)和多肽分子(fēnzǐ)中的肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或者粉紅色，此反響稱為雙縮脲反響。雙縮脲反響可以用來檢測蛋白質(zhì)的水解程度。,五、蛋白質(zhì)的呈色反響,第十六頁，共一百一十三頁。,蛋白質(zhì)的呈色反響,第十七頁，共一百一十三頁。,第二節(jié) 蛋白質(zhì)的別離(fēnl237。)純化,第十八頁，共一百一十三頁。,蛋白質(zhì)在組織和細胞中一般都是以復(fù)雜的混合物形式存在，每種類型(l232。ix237。ng)的細胞都會含上千種不同的蛋白質(zhì)。,為什么要別離(fēnl237。)純化蛋白質(zhì)？,1.研究蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)、組成和某些物化性質(zhì)。 2.研究活性蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能(gōngn233。ng)，要求樣品保持它的天然構(gòu)象，要盡量防止因變性而喪失活性。 3.在制藥工業(yè)中，需要把某種具有特殊功能的蛋白質(zhì)純化到規(guī)定的要求，特別注意把一些具有干擾或拮抗性質(zhì)的成分除去。,第十九頁，共一百一十三頁。,到目前為止，還沒有一個單獨的或一套現(xiàn)成(xi224。nch