xxxx年本科實(shí)驗(yàn)四重組質(zhì)粒dna提取、雙酶切鑒定(已修改)
2025-01-22 11:10 本頁(yè)面
【正文】 質(zhì)粒 DNA的制備 限制性內(nèi)切酶切割重組質(zhì)粒 朱文博 中山醫(yī)學(xué)院 基因克隆 ?定義： 經(jīng)無(wú)性繁殖獲得基因許多相同拷貝的過(guò)程。通常是將單個(gè)基因?qū)胨拗骷?xì)胞中復(fù)制而成。 基因工程 ?定義： 實(shí)現(xiàn)基因克隆所采用的方法及相關(guān)的工作統(tǒng)稱為基因工程，又稱重組 DNA技術(shù)。 ?基因克隆示意圖 載體 DNA(限制性內(nèi)切酶切開(kāi) ) 目的基因＋宿主細(xì)胞＋重組體已轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞陽(yáng)性克隆株繁殖表達(dá)分、切 接 轉(zhuǎn) 篩 基因載體 基因工程中常用的載體 (vector)主要包括質(zhì)粒 (plasmid)、 噬菌體 (phage)和 病毒 (virus)柯斯質(zhì)粒 。這些載體均需經(jīng)人工構(gòu)建，除去致病基因，并賦予一些新的功能，如有利于進(jìn)行篩選的標(biāo)志基因、單一的限制酶切點(diǎn)等。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 (P82) :DNA的瓊脂糖凝膠電泳 ： DNA的紫外分光光度法測(cè)定 (P39) DNA的提取與純化 (P70堿法 ) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ?掌握堿裂解法抽提質(zhì)粒的原理、步驟及各試劑的作用 。 ?掌握 核酸內(nèi)切酶切割 質(zhì)粒的原理并 學(xué)會(huì)運(yùn)用內(nèi)切酶 一 .質(zhì)粒 DNA的提取 1 關(guān)于質(zhì)粒的概念 （ plasmid）？ ？ ？ ？ ？ 8 質(zhì)粒的定義 質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)一種自我復(fù)制的 環(huán)狀雙鏈 DNA分子 ，能穩(wěn)定地獨(dú)立存在于染色體外，并傳遞到子代，一般不整合到宿主染色體上。 在細(xì)胞內(nèi)它們常以共價(jià)閉環(huán)的超螺旋形式存在。 9 (1) 超螺旋 DNA (supercoiled DNA, SC DNA) 質(zhì)粒的三種構(gòu)型 10 (2) 開(kāi)環(huán) DNA (open circular DNA, OC DNA) 如果兩條鏈中有一條的一處或多處斷裂，分子就能發(fā)生旋轉(zhuǎn)而消除鏈的張力，形成松弛型的環(huán)狀分子。 11 (3) 線狀 DNA (linear DNA, L DNA): 如果兩條鏈均斷開(kāi)，即為線狀 DNA。 電泳時(shí)，三者泳動(dòng)速度大小關(guān)系（？？？） 12 最快 中 最慢 質(zhì)粒 DNA的基本特征： (1) 自主復(fù)制性 ：能獨(dú)立于染色體
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