微生物限度檢查法(已修改)
2025-01-09 04:39 本頁面
【正文】 微生物限度檢查法 江蘇省蘇州藥品檢驗所 細(xì)菌、 霉菌（酵母菌） 計數(shù) ? 1簡述 （ 微生物限度檢查的意義 ） ? 細(xì)菌 、 霉菌 、 酵母菌計數(shù)是檢測規(guī)定企業(yè)單位內(nèi)的非滅菌制劑污染的活菌數(shù)量 ， 是判定藥品受到微生物污染程度的重要指標(biāo) ，也是對生產(chǎn)企業(yè)的藥品 、 原料 、 輔料 、 設(shè)備器具 、 工藝流程 、 生產(chǎn)環(huán)境和操作者的衛(wèi)生狀況進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評價的綜合依據(jù)之一 。 細(xì)菌 、 霉菌 、 酵母菌計數(shù)均采用平板菌落計數(shù)法 ， 這是活菌計數(shù)方法之一 ， 也是目前國際上許多國家常用的一種方法 。 ? 該方法以在瓊脂平板上，每個細(xì)菌（營養(yǎng)瓊脂）、霉菌（玫瑰紅鈉瓊脂）、酵母菌（玫瑰紅鈉瓊脂或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂）形成一個獨(dú)立可見的菌落為計數(shù)依據(jù)。 ? 測定結(jié)果只反映在規(guī)定條件下所生長的細(xì)菌 （ 一群在營養(yǎng)瓊脂上發(fā)育的嗜中溫 、 需氧和兼性厭氧菌 ） 、 霉菌和酵母菌的菌落數(shù) 。不包括對營養(yǎng) 、 氧氣 、 溫度 、 PH和其他因素有特殊要求的細(xì)菌 、霉菌和酵母菌 。 ? 一個細(xì)菌 、 霉菌和酵母菌菌落均可由一個或多個菌細(xì)胞形成 。 因此供試品中所測的菌落數(shù)實際為菌落形成單位數(shù) （ colony forming unit ，CFU） ， 而不應(yīng)理解為細(xì)菌 、 霉菌 、酵母菌的個數(shù) 。 微生物檢驗項目 ：細(xì)菌總數(shù)測定、 霉菌與酵母菌總數(shù)測定、控制菌檢驗（包括大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、沙門菌、金黃葡萄球菌、破傷風(fēng)梭菌）以及活螨的檢驗。 ? 設(shè)備 ? 無菌室 ? 2 設(shè)備 、 儀器及用具 ? 無菌室應(yīng)采光良好 、 避免潮濕 、 遠(yuǎn)離廁所及污染區(qū)（ 面積不超過 10m2， 高度不超過） 由緩沖間 （ 2個 ） 、 操作間組成 。 ? 操作間與緩沖間之間應(yīng)有樣品傳遞箱，出入操作間和緩沖間的門不應(yīng)直對。 ? 無菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑平整 ， 能耐受清洗消毒 。 墻與地面及墻壁 、 天花板連接處應(yīng)呈凹弧形無縫隙 ， 不留死角 。 操作間內(nèi)不應(yīng)安裝下水道 。 ? 無菌室內(nèi)的照明燈應(yīng)嵌裝在天花板內(nèi) ，室內(nèi)光照應(yīng)分布均勻 ， 光照度不低于300勒克斯 。 緩沖間和操作間均應(yīng)設(shè)置紫外線殺菌燈 （ ２～２ .5W/m3） ，紫外殺菌燈應(yīng)距實驗臺面高度不超過1M， 并應(yīng)定期檢查輻射強(qiáng)度 ， 不得低于 （ １ M距離 ） 。 不符合要求的紫外殺菌燈應(yīng)及時更換 。 ? 、 濕度 無菌室內(nèi)溫度和相對濕度直接影響紫外殺菌燈殺菌效果 ， 故溫度應(yīng)控制在 18～26℃ ， 相對濕度 40～ 60％ 。 操作間或凈化工作臺的潔凈空氣應(yīng)保持對環(huán)境形成正壓 、 不低于 。 ? 操作間應(yīng)安裝空氣除菌過濾層流裝置 。 潔凈度不應(yīng)低于是 10000級 ， 局部凈化度為 100級 ， 或放置同等級凈化工作臺 ， 并準(zhǔn)備藥物天平 ， 乙醇燈 ， 火柴 ， 乙醇棉 ， 大 、 小橡皮乳頭等 。 ? 緩沖間內(nèi)應(yīng)有洗手盆 ， 無菌衣 、 帽 、 口罩 、 拖鞋等 。緩沖間內(nèi)不應(yīng)放置培養(yǎng)箱和其他雜物 。 ? 級 別 及 檢 查方法 通常采用塵 粒 數(shù) 及 浮 游 菌 數(shù) 或 沉 降 菌 數(shù)測 定 法。 潔凈室（區(qū)）空氣潔凈度級別表 潔凈度級別 塵粒最大允許數(shù) /立方米 ≥ ≥5μm 百級 3， 500 0 萬級 350， 000 2， 000 十萬級 3， 500， 000 20， 000 三十萬級 10， 500， 000 60， 000 級別 微生物最大允許數(shù) 換氣次數(shù) /小時 浮游菌 /立方米 沉降菌 / 皿 百級 5 1 /秒 萬級 100 3 20 十萬級 500 10 15 三十萬級 — 15 ? 浮游菌數(shù)測試方法 （ 參照中人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T162931996） 。 ? 沉降菌數(shù)測定 (Ⅱ 法 ) ? 無菌室操作臺消毒擦拭處理后，先啟動層流凈化裝置 30min， 將備妥的營養(yǎng)瓊脂平板 3個 (經(jīng) 30～ 35℃ 預(yù)培養(yǎng)48h， 證明無菌落生長。 )以無菌方式（或經(jīng)傳遞箱）移入操作間，置凈化臺左、中、右各 1個，開蓋，暴露30min后將蓋蓋上。 在 30～ 35℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)倒置培養(yǎng) 48h，取出檢查。 3個平板生長的平均菌落數(shù)不超過 1個。 ? 無菌室操作臺或凈化工作臺要定期檢測其潔凈度 ， 應(yīng)達(dá)到 100級 。 凈化工作臺中的高效及中效過濾器應(yīng)根據(jù)檢測情況 ， 必要時予以更換處理 。 ? 無菌室應(yīng)在每次操作前、后均用０ .1%苯扎溴銨溶液或其他消毒液擦拭操作臺及可能污染的死角。開動層流凈化裝置，同時用紫外殺菌燈照射 30min。 ? 、 凈化工作臺 、 恒溫培養(yǎng)箱 （ 30～ 35℃ ） 、 生化培養(yǎng)箱（ 25～ 28℃ ） ， 微波爐 （ 或其他適宜加熱裝置 ） 、 康氏振蕩器 、 勻漿儀 （ 3000～ 8000r/min） 、 恒溫水浴 、 電熱干燥箱 （ 250～ 300℃ ） 、電冰箱 、 空調(diào) 、 高壓蒸汽滅菌器（ 使用時要進(jìn)行滅菌效果檢查并應(yīng)定期請有關(guān)部門檢定 ） 。 ? 儀器及器皿 ? 2 . 2 . 1 菌落計數(shù)器 、 顯微鏡（ 1500X） 、 電子天平或藥物天平（ 感量 ） ， pH系列比色計 。 ? 玻璃器皿 錐形瓶 (250～ 300ml，內(nèi)裝玻璃珠若干 )、 研缽 （ 陶瓷制 ，直徑 10～ 12cm） 、 培養(yǎng)皿 (Ф9cm)、量筒 (100ml)、 試管 (18 180mm)及塞 、 吸管 (1ml分度 ， 10ml分度)、 注射器 (20或是 30ml)、 注射針頭 、 載玻片 、 蓋玻片 、 玻璃消毒缸(帶蓋 ) 。 ? 玻璃器皿用前應(yīng)洗滌干凈 ， 無殘留抗菌物質(zhì)吸管口上端距 入約 2cm的適宜疏松棉花 ， 置吸管桶內(nèi)或牛皮紙袋中 。 錐形瓶 、 量筒 、試管均應(yīng)加棉塞或硅膠塞 ， 再用牛皮紙包扎 。 玻璃器皿 ， 均于 160℃干熱滅菌 2h或高壓蒸汽 121℃ 滅菌30mi
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