植物基因組dna的提取和定性、定量分析報(bào)告(已修改)
2025-08-13 19:43 本頁(yè)面
【正文】 .. . . ..《分子生物學(xué)》實(shí)驗(yàn)報(bào)告 實(shí)驗(yàn)一 植物基因組DNA的提取及其定性、定量分析【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?通過(guò)本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)利用CTAB法從植物組織中提取DNA并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳及紫外分光光度法對(duì)DNA進(jìn)行定性定量分析?！緦?shí)驗(yàn)原理】 CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)是一種陽(yáng)離子型去污劑，可溶解細(xì)胞膜，在高離子強(qiáng)度下( M NaCl)，與蛋白和中性多糖形成復(fù)合物沉淀出來(lái)。利用液氮對(duì)植物組織進(jìn)行研磨，從而破碎細(xì)胞。然后加入CTAB緩沖液將DNA溶解出來(lái)，再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，最后經(jīng)乙醇沉淀得到DNA。瓊脂糖凝膠電泳是分離和純化DNA片段的常用技術(shù)。把DNA樣品加入到一塊包含電解質(zhì)的多孔支持介質(zhì)(瓊脂糖凝膠)的樣品孔中，并置于靜電場(chǎng)上。DNA分子在高于等電點(diǎn)的pH溶液中帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。由于糖磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此，在一定的電場(chǎng)強(qiáng)度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)，即DNA分子本身的大小和構(gòu)型。DNA分子的遷移速度與相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)值成反比關(guān)系，分子量小的DNA分子比分子量大的DNA分子遷移速率快，遷移距離遠(yuǎn)，由此得到分離。凝膠電泳也可以分離相對(duì)分子質(zhì)量相同，但構(gòu)型不同的DNA分子，超螺旋質(zhì)粒DNA(cccDNA)泳動(dòng)最快，其次為線狀DNA(L DNA)，最慢的為開環(huán)質(zhì)粒DNA(ocDNA)。核酸分子(DNA或RNA)由于含有嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)的共軛雙鍵，在260 nm波長(zhǎng)處有特異的紫外吸收峰，其吸收強(qiáng)度與核酸的濃度成正比，這個(gè)物理特性為測(cè)定核酸溶液濃度提供了基礎(chǔ)。1 OD260相當(dāng)于dsDNA 50 μg/mL，ssDNA 33 μg/mL和ssRNA 40 μg/mL?？梢源藖?lái)計(jì)算核酸樣品的濃度。紫外分光光度法不但能確定核酸的濃度，還可通過(guò)測(cè)定260 nm和280 nm的紫外線吸收值的比值(A260/A280)估計(jì)核酸的純度，若DNA的A260/，則可能有RNA污染?！緝x器、材料與試劑】 一、儀器及耗材離心機(jī)、恒溫水浴器、臺(tái)式離心機(jī)、電子天平、水平電泳槽、電泳儀、凝膠成像分析系統(tǒng)、高壓滅菌鍋、紫外線透射儀、微波爐、紫外分光光度儀、微量移液器(100、1000 μL量程各一支)、100 mL或250 mL錐形瓶、量筒、液氮、研磨棒、點(diǎn)樣板或parafilm、吸頭、 mL EP管、PE手套和乳膠手套。二、藥
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