免疫組化非標(biāo)記免疫酶法(pap)(已修改)
2025-07-07 06:43 本頁面
【正文】 非標(biāo)記抗體酶法 由于酶標(biāo)抗體存在一些缺點(diǎn)，例如①酶與抗體間的共價連結(jié)可損害部分抗體和酶的活性；②抗血清中的非特異性抗體被酶標(biāo)記后，與組織成分結(jié)合，可致背景染色等。為此Sternberger等在酶標(biāo)法的基礎(chǔ)上，發(fā)展了非標(biāo)記抗體酶法。包括酶橋法（Enzyme Bridge Method）和過氧化物酶抗過氧化物酶法（Peroxidase Antiperoxidase Method, PAP法）。現(xiàn)分述如下?！ 。ㄒ唬┟笜蚍ā ?．基本原理 首先用酶免疫動物，制備效價高、特異性強(qiáng)的抗酶抗體，然后使用第二抗體作橋，將抗酶抗體連結(jié)在與組織抗原結(jié)合的第一抗體上，再將酶結(jié)合在抗酶抗體，經(jīng)呈色顯示抗原的分布。在此過程中，任何抗體均未被酶標(biāo)記，酶是通過免疫學(xué)原理與抗酶抗體結(jié)合，避免了共價連結(jié)對抗體和酶活性的損害，提高方法的敏感性，且能節(jié) 省第一抗體的用量。 2．染色步驟 主要程序如圖44圖44 酶橋法主要染色步驟 ?。?）切片準(zhǔn)備及第一抗體孵育前處理同間接法，第一抗體（假設(shè)來自種屬A）孵育24h（4℃）。第一抗體的稀釋度可高些，使抗體的兩個Fab段均與組織抗原結(jié)合，較牢固，漂洗時不易丟失?！ 。?）切片與第二抗體（也稱橋抗體，抗種屬a IgG抗體）孵育1～（室溫）。應(yīng)用過量的橋抗體能保證一個Fab段與第一抗體結(jié)合，另一個Fab段游離?！ 。?）切片與抗酶抗體（來自種屬A）孵育1～（室溫）。因抗酶抗體和第一抗體均系種屬a IgG，
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