免疫組化非標(biāo)記免疫酶法(pap)(完整版)
【正文】 對抗體和酶活性的損害，提高方法的敏感性，且能節(jié) 省第一抗體的用量。包括酶橋法（Enzyme Bridge Method）和過氧化物酶抗過氧化物酶法（Peroxidase Antiperoxidase Method, PAP法）?！ 。?）切片與抗酶抗體（來自種屬A）孵育1～（室溫）。為此70年代初，Sternberger(1970)又建立了PAP法，并加以改良，現(xiàn)為ICC研究中常用的方法之一?！ 、诨靹?，室溫1h后，離心16000g 4℃15min。PAP復(fù)合物的形狀相當(dāng)穩(wěn)定，不受抗原量的影響，無論最初加入的抗原抗體過量與否，最終形成的PAP復(fù)合物其HRP/抗HRP之比絕大部分為3：2?！ 、偾衅瑴?zhǔn)備及第一抗體孵育前處理同間接法；切片與特異性第一抗體孵育同酶橋法。從理論上講，PAP法應(yīng)該較間接法敏感2倍以上，因?yàn)槊笜?biāo)抗體法中，酶與抗體為1：1標(biāo)記，而PAP復(fù)合物含有3個HRP分子。我們知道組織切片抗原的含量是未知的，所以不能直接在切片上檢測方法的敏感度；但可以假設(shè)相鄰切片抗原濃度相對恒定，采用相鄰切片染色，以產(chǎn)生特異性染色所用的第一抗體最低濃度作為方法的敏感度，用信噪比（Signal/moise,S/N）表示。圖45 PAP法主要染色步驟 ?、塾秒x體制得的PAP復(fù)合物（1：30～300稀釋）孵育1～（室溫），使其被橋抗體連結(jié)在第一抗體上。采用H2O2DAB染色，電鏡下已經(jīng)觀察到PAP復(fù)合物五角形環(huán)狀結(jié)構(gòu)，直徑平均2
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