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免疫組化非標(biāo)記免疫酶法(pap)(參考版)

2025-06-28 06:43本頁(yè)面
  

【正文】 。其原因尚不清楚,可能與橋抗體和第一抗體結(jié)合時(shí),“剩余”(游離)的Fab段少,PAP復(fù)合物被連結(jié)的相應(yīng)減少有關(guān)。但實(shí)際上PAP法與間接法之間的差異并非如此明顯。我們知道組織切片抗原的含量是未知的,所以不能直接在切片上檢測(cè)方法的敏感度;但可以假設(shè)相鄰切片抗原濃度相對(duì)恒定,采用相鄰切片染色,以產(chǎn)生特異性染色所用的第一抗體最低濃度作為方法的敏感度,用信噪比(Signal/moise,S/N)表示。從理論上講,PAP法應(yīng)該較間接法敏感2倍以上,因?yàn)槊笜?biāo)抗體法中,酶與抗體為1:1標(biāo)記,而PAP復(fù)合物含有3個(gè)HRP分子。其主要特征和注意事項(xiàng)如下: ?。?)抗體活性高:非標(biāo)記抗體酶法最大限度地保存了抗體活性,因?yàn)樵谒械姆磻?yīng)過(guò)程中,任何抗體均未被酶連結(jié),避免了標(biāo)記過(guò)程(共價(jià)鍵連結(jié))對(duì)抗體活性的損害?! 、茱@色觀察等同間接法。圖45 PAP法主要染色步驟  ③用離體制得的PAP復(fù)合物(1:30~300稀釋)孵育1~(室溫),使其被橋抗體連結(jié)在第一抗體上?! 、偾衅瑴?zhǔn)備及第一抗體孵育前處理同間接法;切片與特異性第一抗體孵育同酶橋法。PAP復(fù)合物中的抗HRP抗體和第一抗體為相同種屬動(dòng)物的IgG,所以橋抗體能夠作為“橋”將PAP復(fù)合物連結(jié)在第一抗體上。據(jù)報(bào)告PAP復(fù)合物的抗HRP抗體與HRP結(jié)合常數(shù)為108,在此可溶性復(fù)合物中,即使存在少量游離HRP,亦不影響其穩(wěn)定性。采用H2O2DAB染色,電鏡下已經(jīng)觀察到PAP復(fù)合物五角形環(huán)狀結(jié)構(gòu),直
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【摘要】免疫組織化學(xué)抗體手冊(cè)目錄;807)D17、18、19