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免疫組化非標(biāo)記免疫酶法(pap)-資料下載頁

2025-06-25 06:43本頁面
  

【正文】 著廣闊的前景。其主要特征和注意事項如下: ?。?)抗體活性高:非標(biāo)記抗體酶法最大限度地保存了抗體活性,因為在所有的反應(yīng)過程中,任何抗體均未被酶連結(jié),避免了標(biāo)記過程(共價鍵連結(jié))對抗體活性的損害?! 。?)靈敏度高:靈敏度是指ICC方法所能發(fā)現(xiàn)最少數(shù)量抗原而言。從理論上講,PAP法應(yīng)該較間接法敏感2倍以上,因為酶標(biāo)抗體法中,酶與抗體為1:1標(biāo)記,而PAP復(fù)合物含有3個HRP分子。假設(shè)一個第一抗體同一個酶標(biāo)抗體/PAP復(fù)合物結(jié)合,則被連結(jié)于抗原部位的酶分子數(shù)量不同,所以PAP法應(yīng)較敏感。我們知道組織切片抗原的含量是未知的,所以不能直接在切片上檢測方法的敏感度;但可以假設(shè)相鄰切片抗原濃度相對恒定,采用相鄰切片染色,以產(chǎn)生特異性染色所用的第一抗體最低濃度作為方法的敏感度,用信噪比(Signal/moise,S/N)表示。據(jù)此,Sternberger(1979)認(rèn)為PAP法較間接法敏感20~25倍,可進一步稀釋第一抗體,以節(jié) 省其用量。但實際上PAP法與間接法之間的差異并非如此明顯。筆者在實驗中注意到,PAP顯示陽性的抗原,相同的稀釋倍數(shù)的第一抗體在間接法中亦呈陽性反應(yīng),而時間陰性時,PAP法亦為陰性。其原因尚不清楚,可能與橋抗體和第一抗體結(jié)合時,“剩余”(游離)的Fab段少,PAP復(fù)合物被連結(jié)的相應(yīng)減少有關(guān)。另外 ,PAP復(fù)合物分子量較大(400KD),冰凍切片時,對組織穿透性遠(yuǎn)不如酶標(biāo)抗體(分子量90~180kDa),所以不適于免疫電鏡的標(biāo)本制作。
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