免疫組化非標(biāo)記免疫酶法(pap)-wenkub.com
2025-06-22 06:43 本頁(yè)面
【正文】 另外 ，PAP復(fù)合物分子量較大（400KD）,冰凍切片時(shí)，對(duì)組織穿透性遠(yuǎn)不如酶標(biāo)抗體（分子量90～180kDa），所以不適于免疫電鏡的標(biāo)本制作。據(jù)此，Sternberger(1979)認(rèn)為PAP法較間接法敏感20～25倍，可進(jìn)一步稀釋第一抗體，以節(jié) 省其用量?！ 。?）靈敏度高：靈敏度是指ICC方法所能發(fā)現(xiàn)最少數(shù)量抗原而言。亦可用ALP抗ALP復(fù)合物代替。 ?。?）染色步驟：主要步驟與酶橋法相似，如圖45。這種結(jié)構(gòu)異常穩(wěn)定。PAP復(fù)合物的形成不同于其它抗原抗體反應(yīng)，在抗原稍過量時(shí)，所有的抗HRP抗體均參與形成可溶性PAP復(fù)合物，僅殘留少許游離的HRP，而大多數(shù)抗原抗體反應(yīng)需要抗原絕對(duì)過量才能形成可溶性復(fù)合物。 ?、萦?N ，沉淀物全部溶解變清，立即用1N ?！ 静襟E】 ?、伲ǎ┑乃芤?。間隔2周第2次注射，；再間隔2周，第3次注射，2mgHRP（溶于2ml生理鹽水中），分別于前后小腿皮下和背部肌肉內(nèi)多點(diǎn)注射，1周后采靜脈血，檢查效價(jià)。②第三步所用的抗酶抗體血清中，亦含有非特異性抗體，其抗原性與抗酶抗體相同，所以能與橋抗體結(jié)合，但不能與酶結(jié)合，影響組織抗原的顯示?！ 。?）顯色等與酶標(biāo)抗體法相同。應(yīng)用過量的橋抗體能保證一個(gè)Fab段與第一抗體結(jié)合，另一個(gè)Fab段游離。在此過程中，任何抗體均未被酶標(biāo)記，酶是通過免疫學(xué)原理與抗酶抗體結(jié)合，避免了共價(jià)連結(jié)對(duì)抗體和酶活性的損害，提高方法的敏感性，且能節(jié) 省第一抗體的用量。為
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