免疫組化非標(biāo)記免疫酶法(pap)(存儲(chǔ)版)
【正文】 ，HRP的純度要高（RZ≥3），而制備PAP復(fù)合物時(shí)，HRP的質(zhì)量要求不高，甚至可用酶的粗制品?！ 、?，對透析液（ NaCl, NaOOCCH3 30ml, 3N(NH4)2SO430ml, ）透析，4℃離心，收集上清，分裝低溫保存。PAP復(fù)合物中的抗HRP抗體和第一抗體為相同種屬動(dòng)物的IgG，所以橋抗體能夠作為“橋”將PAP復(fù)合物連結(jié)在第一抗體上。其主要特征和注意事項(xiàng)如下： ?。?）抗體活性高：非標(biāo)記抗體酶法最大限度地保存了抗體活性，因?yàn)樵谒械姆磻?yīng)過程中，任何抗體均未被酶連結(jié)，避免了標(biāo)記過程（共價(jià)鍵連結(jié)）對抗體活性的損害。其原因尚不清楚，可能與橋抗體和第一抗體結(jié)合時(shí)，“剩余”（游離）的Fab段少，PAP復(fù)合物被連結(jié)的相應(yīng)減少有關(guān)。但實(shí)際上PAP法與間接法之間的差異并非如此明顯?！ 、茱@色觀察等同間接法。據(jù)報(bào)告PAP復(fù)合物的抗HRP抗體與HRP結(jié)合常數(shù)為108，在此可溶性復(fù)合物中，即使存在少量游離HRP，亦不影響其穩(wěn)定性?！ 、蘼拥润w積的飽和硫酸銨，置0℃45min。再隔1周第4次加強(qiáng)注射（條件同第3次），一周后檢查抗體效價(jià)，瓊脂糖擴(kuò)散法（）為1：128以上時(shí)，頸動(dòng)脈取血，制備血清低溫保存?zhèn)溆??！ ∶笜蚍朔嗣笜?biāo)抗體法的缺點(diǎn)，較好地保護(hù)了抗體和酶活性?！ ?．染色步驟 主要程序如圖44圖44 酶橋法主要染色步驟 ?。?）切片準(zhǔn)備及第一抗體孵育前處理同間接法，第一抗體（假設(shè)來自種屬A）孵育24h（4℃）。
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