【正文】 動物生物化學實驗指導（修訂版）武漢工業(yè)學院生物化學實驗室規(guī)則1．每個同學都應該自覺遵守課堂紀律，維護課堂秩序，不遲到，不早退，不大聲談笑。2．實驗前必須認真預習，熟悉本次實驗的目的、原理、操作步驟，懂得每一操作步驟的意義和了解所用儀器的使用方法，否則不能開始實驗。3．實驗過程中要聽從教師的指導，嚴肅認真地按操作規(guī)程進行實驗，并把實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)及時、如實記錄在實驗記錄本上，文字要簡練、準確。完成實驗后經(jīng)教師檢查同意，方可離開實驗室。4．實驗臺面應隨時保持整潔，儀器、藥品擺放整齊。公用試劑用完后，應立即蓋嚴放回原處。勿使試劑、藥品灑在實驗臺面和地上。實驗完畢，儀器洗凈放好，將實驗臺面抹拭干凈，才能離開實驗室。5．使用儀器、藥品、試劑和各物品必須注意節(jié)約。洗滌和使用儀器時，應小心仔細，防止損壞儀器。使用貴重精密儀器時，應嚴格遵守操作規(guī)程，發(fā)現(xiàn)故障須立即報告教師，不得擅自動手檢修。6．實驗室內(nèi)嚴禁吸煙！加熱用的電爐應隨用隨關(guān)，嚴格做到：人在爐火在，人走爐火關(guān)。乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加熱，并要遠離火源操作和放置。實驗完畢，應立即撥去電爐開關(guān)和關(guān)好水籠頭，拉下電閘。離開實驗室以前應認真、負責地進行檢查水電，嚴防發(fā)生安全事故。7．廢液體可倒入水槽內(nèi)，同時放水沖走。強酸、強堿溶液必須先用水稀釋。廢紙屑及其他固體廢物和帶渣滓的廢物倒入廢品缸內(nèi)；不能倒入水槽或到處亂扔。8．要精心使用和愛護儀器，如使用分光光度計時，不能將比色杯直接置于分光光度計上，并注意拿放比色杯時，不要打碎。儀器損壞時，應如實向教師報告，并填寫損壞儀器登記表，然后補領(lǐng)。9．實驗室內(nèi)一切物品，未經(jīng)本室負責教師批準，嚴禁帶出室外，借物必須辦理登記手續(xù)。實驗一 唾液淀粉酶活性的觀察原理酶是指化學本質(zhì)為大分子的生物催化劑。在一定條件下，酶促化學反應進行的能力即酶活性。影響酶活性的因素是多方面的，如溫度、pH及某些化學物質(zhì)等都會影響酶的催化活性。在一定條件下，能使酶活性達到最高時的溫度即酶的最適溫度，而能使酶活性達到最高時的PH即酶的最適PH。例如，唾液淀粉酶的最適溫度是37℃。能增高酶活性的物質(zhì)稱為酶的激活劑，能降低酶活性卻又不使酶變性的物質(zhì)叫酶的抑制劑。凡能使蛋白質(zhì)變性的因素都可以使酶因變性而喪失活性。酶活性通常是通過測定酶促化學反應的底物或產(chǎn)物量的變化來進行觀察的。本實驗用唾液淀粉酶為材料來觀察酶活性受理化因素影響的情況，唾液中含有唾液淀粉酶，唾液淀粉酶的底物是淀粉。淀粉在該酶的催化作用下會隨著時間的延長而出現(xiàn)不同程度的水解，從而得到各種糊精乃至麥芽糖、少量葡萄糖等水解產(chǎn)物。而碘液能指示淀粉的水解程度——淀粉遇碘呈紫色、暗褐色與紅色，而麥芽糖與葡萄糖遇碘則不呈顏色反應，如圖所示：淀 粉 淀粉酶 糊 精 淀粉酶 麥芽糖+少量葡萄糖加碘后： （藍色） （紫紅色、暗褐色或紅色等） （棕黃色、碘本身顏色）試劑及器材：（1）%（w/v）淀粉溶液：，加少量預冷的蒸餾水，在研缽中調(diào)成糊狀，再徐徐倒入約90mL沸水，同時不斷攪拌，最后加水定容為100mL即成。要求新鮮配制。（2）稀碘溶液： I2g KI，加少量蒸餾水溶解后，再加蒸餾水至200mL。保存于棕色瓶中，用前5倍稀釋。（3）不同pH溶液：： ，將之溶于蒸餾水后定容至1000Ml。：，將之溶于蒸餾水后定容至1000Ml。① 、。② 、。③ 、。配好緩沖液后應用酸度計驗證。（4）%（w/v）蔗糖溶液：，將之溶于蒸餾水后定容至100mL。（5）斑氏試劑：，將之溶于100mL預熱的蒸餾水中，冷卻后用蒸餾水稀釋至150ml。B液稱取檸檬酸鈉173g、Na2CO3100g，再加蒸餾水600mL，加熱溶解后冷卻，用蒸餾水稀釋至850mL。將A液與B液混合即得斑氏試劑。（6）1%（w/v）NaCl溶液：稱取NaCl 1g，將之溶解后用蒸餾水稀釋至100mL。（7）1%（w/v）CuSO4溶液：稱取無水CuSO41g，將之溶解后用蒸餾水稀釋至100Ml。（1）白瓷板（或比色板）（2）恒溫水浴鍋（3）電爐操作唾液淀粉酶應用液的制備（1） 每人取一個干凈的飲水杯，裝上蒸餾水。（2） 先用蒸餾水漱口，將口腔的食物殘渣清除干凈。（3） 口含約20mL蒸餾水，做咀嚼動作12分鐘，以分泌較多的唾液。然后將口腔中的唾液吐入一個干凈的小燒杯中。（4） 取一塊干凈的白瓷板，按表11進行實驗。表11穴號試劑（滴）1234567蒸餾水222222棄去唾液222222%淀粉222222碘液（滴）111111結(jié)果（顏色）以呈棕紅色者濃度為準，稀釋原唾液作應用液。溫度對酶活性的影響（1） 取3支試管，按表12進行實驗。表12試管編號123%淀粉（mL）555（mL）稀釋唾液（mL）不同溫度（℃）置冰水浴中置37℃水浴中置沸水浴中將各管中的試劑加好后混勻，然后及時在上述溫度下分別進行處理。（1） 在干凈的比色板上，于各孔穴中分別滴加2滴碘液。（2） 每隔1分鐘從第2支試管取反應液1滴，與比色板孔穴中的碘液混合，觀察顏色的變化。（3） 待第2支試管中的反應液與比色板孔穴中的碘液混合后顏色不再變化時，取出試管，并將在沸水浴中處理的試管用冷水冷卻，然后向各試管中滴加碘液13滴。搖勻后觀察并記錄各管顏色，比較各管中淀粉水解的程度，說明溫度對酶活性的影響。pH對酶活性的影響（1） 取3支試管，按表13編號后進行實驗。表13管號%淀粉（mL）123222不同濃度pH緩沖液（mL）222稀釋唾液（滴）101010搖勻后，將各管置于37℃水浴中處理。（2） ，隨后滴加稀碘液1滴，觀察其顏色變化。（3） 待顏色呈棕色時，向各管中加稀碘液13滴。觀察各管顏色，比較各管中淀粉水解的程度，解釋pH對酶活性的影響。酶反應的特異性（1） 取2支試管，按表14編號后進行實驗。表14試管號12%淀粉（mL）2%蔗糖（mL）2稀釋唾液（mL）11（2） 搖勻后，將各管置于37℃水浴中處理10min。（3） 取出試管，分別加入斑氏試劑2mL，混勻。（4） 將各管置于沸水浴煮沸25min。觀察并解釋結(jié)果。激活劑與抑制劑對酶活性的影響（1）取3支試管，按下表編號后進行實驗。試管號123%淀粉（ml）1%NaCl溶液（ml）——1%CuSO4——蒸餾水（ml）——稀釋唾液搖勻后，將各管置于37℃水浴中處理。（2）每隔1分鐘從第1支試管中取出1滴反應液滴于白瓷板上，隨后滴加稀碘液1滴，觀察其顏色變化。（3）待顏色呈棕色時，取出3支試管，向各管中加稀碘液13滴。觀察各管顏色，并解釋之。實驗二 血清總蛋白的含量測定原理本法所用試劑因能與雙縮脲(H2NOC－NHCONH2)產(chǎn)生紫紅色反應而被稱為雙縮脲試劑。實際上凡分子內(nèi)含有兩個氨基甲?；?CONH2)的化合物，不論是直接相連或是通過一個氮或碳原于間接連接，均能與雙縮脲試劑發(fā)生反應。蛋白質(zhì)分子內(nèi)含有許多肽鍵(—CONH—)，因此可用雙縮脲法作比色測定。不含—CONH