血清球蛋白的分離純化與鑒定(已修改)
2025-06-07 18:25 本頁(yè)面
【正文】 實(shí)驗(yàn)二 血清 γ 球蛋白的分離純化與鑒定 層析技術(shù) 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)思路 實(shí)驗(yàn)流程及操作注意事項(xiàng) 層 析 技 術(shù) 1． 層析法 ：又稱色譜法，是一種廣泛運(yùn)用的物質(zhì)分離純化、分析鑒定技術(shù) . 2. 依據(jù) ：混合物中各組分的理化性質(zhì)差異 — 吸附力、分子形狀、大小、酸堿性或分子極性、分子親和力以及分配系數(shù)。 固定相 — 固定不動(dòng) 流動(dòng)相 — 對(duì)固定相作單向相對(duì)運(yùn)動(dòng)，推動(dòng)樣品中各組分通過(guò)固定相向前移動(dòng)。各組分理化性質(zhì)不同，對(duì)流動(dòng)相和固定相具有不同的作用力，因此在流動(dòng)相推動(dòng)樣品通過(guò)固定相的過(guò)程中，通過(guò)不斷地吸附、解吸、吸附、解吸作用，造成混合物中各組分在固定相中的遷移距離不等，達(dá)到分離。 3． 基本原理 ：固定相和流動(dòng)相 4． 分類 ： ① 流動(dòng)相的物理狀態(tài)：氣相和液相 → 氣液 /固， 液固 /液 ② 方式：紙、薄層、 柱 ③ 原理：吸附、分配、 凝膠 、離子交換、親和、金屬螯合、疏水、反相 5．凝膠層析 (凝膠過(guò)濾、凝膠色譜、分子篩層析、分子排阻層析 ) ① 定義 ：指混合物隨流動(dòng)相流經(jīng)固定相的層析柱時(shí)，混合物中各組分按其分子大小不同而被分離的技術(shù)。 ② 基本原理： 固定相 ：凝膠，惰性三維空間多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，故稱分子篩，包括瓊脂糖、 交聯(lián)葡聚糖 、聚丙烯酰胺、瓊脂糖 葡聚糖復(fù)合凝膠。 流動(dòng)相 ：洗脫液 交聯(lián)葡聚糖凝膠 多聚葡萄糖與環(huán)氧丙烷交聯(lián)而成，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)珠狀顆粒，商品名為 Sephadex G系列 G— 交聯(lián)度： G后面的阿拉伯?dāng)?shù)字表示不同的規(guī)格型號(hào)，有 G10， G15， G25， G50， G75， G100， G150，和 G200八種，具體含義為凝膠得水值的 10倍或吸水量（ g） /10g干膠 交聯(lián)度與孔徑大小成反比：交聯(lián)度越大，孔徑越小，吸水性??；交聯(lián)度越小，孔徑越大，吸水性大。因此， “ G” 反映凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分部范圍。 長(zhǎng)鏈狀葡聚糖分子間
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