血清球蛋白的分離純化與鑒定-全文預(yù)覽
【正文】 ～ 5% α2 pI6 4% ～ 9% β % ～ 12% γ pI= 2% ～ 20% 球蛋白 實(shí)驗(yàn)思路 分段鹽析去除雜蛋白 凝膠層析脫鹽 交聯(lián)葡聚糖吸水濃縮 醋酸纖維素薄膜電泳鑒定 上午完成 下午完成 先粗后細(xì) ① 分段鹽析： ?常用中性鹽： 硫酸銨 、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。因此， “ G” 反映凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分部范圍。各組分理化性質(zhì)不同，對(duì)流動(dòng)相和固定相具有不同的作用力，因此在流動(dòng)相推動(dòng)樣品通過固定相的過程中，通過不斷地吸附、解吸、吸附、解吸作用，造成混合物中各組分在固定相中的遷移距離不等，達(dá)到分離。 固定相 — 固定不動(dòng) 流動(dòng)相 — 對(duì)固定相作單向相對(duì)運(yùn)動(dòng)，推動(dòng)樣品中各組分通過固定相向前移動(dòng)。 流動(dòng)相 ：洗脫液 交聯(lián)葡聚糖凝膠 多聚葡萄糖與環(huán)氧丙烷交聯(lián)而成，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)珠狀顆粒，商品名為 Sephadex G系列 G— 交聯(lián)度： G后面的阿拉伯?dāng)?shù)字表示不同的規(guī)格型號(hào)，有 G10， G15， G25， G50， G75， G100， G150，和 G200八種，具體含義為凝膠得水值的 10倍或吸水量（ g） /10g干膠 交聯(lián)度與孔徑大小成反比：交聯(lián)度越大，孔徑越小，吸水性小；交聯(lián)度越小，孔徑越大，吸水性大。如大小不同的兩種全排阻分子 /完全滲透分子。 ?分段鹽析：各種蛋白大小、親水程度、 pI不同，所需的鹽濃度、 pH也不一樣。一般室溫即可 ,少數(shù)溫度敏感型蛋白質(zhì)需 4度操作，而血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白在25度比 0度時(shí)溶解度低，更易鹽析。鹽析前血清加等量生理鹽水稀釋，控制蛋白質(zhì)含量在 %。 ③ 濃縮： sephadex G25吸水，利用高分子性質(zhì)。 電泳系統(tǒng)：電泳支持介質(zhì)、電泳緩沖液、電場(chǎng) COO
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