酶的提取與分離純化(1)-全文預(yù)覽
【正文】 超濾原理的示意圖 ★ ?超濾法在蛋白質(zhì)溶液除鹽、濃縮及分離純化中有廣泛的應(yīng)用。 第三節(jié) 酶的精制 (純化 ) 酶純化的基本原則： ①建立一個方便靈敏的分析方法； ②選擇有效的純化方法，盡可能減少純化步驟； ③常在低溫（ 4℃ ）條件下進(jìn)行純化，以避免酶的變性。 ★ 2 加壓膜分離 根據(jù)所截留物質(zhì)顆粒大小的不同，分為： 截留顆粒 直徑 操作壓力 應(yīng)用 微濾 ?m 除菌 超濾 ?m 分離病毒及生物大分子 反滲透 20A 純水制備 ★ ● 微濾 (Microfiltration， MF) 一種靜態(tài)過濾，隨過濾時間延長，膜面上截流沉積不溶物，引起水流阻力增大，透水速率下降，直至微孔全被堵塞； 無流動操作滲透 液原料液★ ● 超濾 (ultrafiltration， UF ) 一種動態(tài)過程，由泵提供推動力，在膜表面產(chǎn)生兩個分力：一個是垂直于膜面的法向分力，使水分子透過膜面，另一個是于膜面平行的切向力，把膜面截流物沖掉。 滲透與反滲透 ★ 3. 電場膜分離 電滲析： 在半透膜的兩側(cè)分別裝上正、負(fù)電極。將植物色素溶液通過裝有 CaCO3 吸附劑的柱子，然后用石油醚淋洗，各種色素以不同的速率流動后形成不同的色帶而被分開。 分配層析： 利用不同組分在流動相和固定相 之間的分配系數(shù)的不同。 紙層析： 用濾紙做液體的載體，點(diǎn)樣后，用流動 相展開，以達(dá)到分離鑒定的目的。 ★ 吸附作用的強(qiáng)弱 主要與吸附劑和被吸附物質(zhì)的性質(zhì)有關(guān) 吸附層析的關(guān)鍵 是吸附劑和洗脫劑的選擇。 ★ Sizeexclusion chromatography ② 凝膠的種類和性質(zhì) ▼ 交聯(lián)葡聚糖凝膠 （ dextran gel) 商品名 :Sephadex 型號 Sephadex G－ 10至 G200 G 后的數(shù)字為凝膠吸水值的 10倍。 ★ 型號 使用范圍 （蛋白質(zhì)的分子量） 含瓊脂糖 （ ℅ ） 6B Sepharose 4B 2B 104～ 3 106 105～ 3 107 106～ 108 6 4 2 6B Sepharose CL 4B
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