表達(dá)產(chǎn)物的分離純化-全文預(yù)覽
【正文】 Sephadex C25 CMSephadex C50 SP Sephadex C50 陽離子型： 陰離子型： 4）離子交換瓊脂糖 CMSepharose 是攜帶 DEAE或 CM基團(tuán)的 Sepharose CL6B，具有硬度大 、 性質(zhì)穩(wěn)定 、 流速好 、 分離能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn) ， 受 pH和離子強(qiáng)度影響引起的膨脹和收縮效應(yīng)小 ， 外形和體積穩(wěn)定 。 3）離子交換葡聚糖 是葡聚糖經(jīng)環(huán)氧氯丙烷交聯(lián)后形成的 、具有多孔三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 、 離子交換功能基團(tuán)的多糖衍生物 。 常用的離子交換劑 1）離子交換樹脂 常見的是含酸性或堿性基團(tuán) 、 人工合成的聚苯乙烯 二乙烯苯不溶性高分子化合物 。 帶負(fù)電荷，結(jié)合帶正電荷的蛋白質(zhì) 強(qiáng)酸型 弱酸型 強(qiáng)離子交換劑： 弱離子交換劑： 電離率受 pH影響很大 ， 離子交換作用的pH范圍窄 。 3） 若有兩種以上成分吸附在離子交換劑上 ， 各成分被洗脫的可能性取決于各自反應(yīng)的解離常數(shù) 。 （三）離子交換層析 離子交換層析的基本原理 離子交換介質(zhì)的基本性質(zhì) 離子交換介質(zhì)的選擇原則 離子交換層析的基本操作 離子交換層析的基本原理 以 離子交換劑 為 固定相 、 以特定 含離子溶液 為 流動(dòng)相 ， 利用離子交換劑與待分離的各種離子結(jié)合力的差異 ， 將混合物中不同離子進(jìn)行分離的層析技術(shù) 。 透析的用途： 實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的蛋白質(zhì)分離純化 。 因此 ， 實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)路線 = 生產(chǎn)工藝 。 首先選擇能除去含量最多雜質(zhì)的方法； 選擇分離純化方法時(shí)，應(yīng)遵循下列 原則 ： 選擇不同分離純化機(jī)理的方法聯(lián)合使用； 盡量選擇高效的分離方法； 將最費(fèi)時(shí)、成本最高的分離純化方法排在最后。 前提是具備重組蛋白的特異性配體 ， 如抗體 、 受體 、 底物等 ， 且它們與目標(biāo)蛋白間的解離常數(shù) Kd為 108104 mol/L。五、外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化 重組蛋白分離純化方法選擇的原則 透析和超濾 離子交換層析 凝膠層析 親和層析 原核生物表達(dá)的重組蛋白質(zhì)量檢測 （一）重組蛋白分離純化方法選擇的原則 針對不同的產(chǎn)物表達(dá)形式采取不同的策略 針對不同性質(zhì)的重組蛋白選擇不同的層析類型 多種分離純化技術(shù)的聯(lián)合運(yùn)用 合適分離純化介質(zhì)的選擇 分離純化過程的規(guī)?；? 針對產(chǎn)物的表達(dá)形式采取不同的策略 應(yīng)先離心回收包涵體 。 包涵體型表達(dá)： 分泌型表達(dá)： 融合型表達(dá)： 針對重組蛋白的性質(zhì)選擇不同的層析類型 1） 離子交換層析： 是等電點(diǎn)處于極端區(qū)域 （ pI≤5或 pI≥8） 重組蛋白的首選 ， 易除去幾乎所有的雜蛋白 。 多種分離純化技術(shù)的聯(lián)合運(yùn)用 重組蛋白純化時(shí)，通常需綜合使用多種技術(shù)。 實(shí)驗(yàn)室方法在規(guī)?；a(chǎn)中成本過高，如超速 離心 。 脫鹽； 去除小分子雜質(zhì)； 置換緩沖液 。 超濾的用途： 脫鹽； 去除小分子雜質(zhì)； 濃縮； 除菌。 2） 所含 可解離基團(tuán) 在水溶液中能與其它陰 、 陽離子起交換作用 。 離子交換劑的分類 帶正電荷，結(jié)合帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì) 強(qiáng)堿型 弱堿型 陽離子交換劑： 陰離子交換劑： 選擇陰離子還是陽
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