【正文】 《 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 》 要點 衛(wèi)生部臨床檢驗中心 聯(lián)系： 13613225357 一、 特點概述 ? 1． 《 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 （ 2022年版 ） 》是 參 考 國 際 標 準 ISO/DIS 151892022 、ISO/DIS 151902022 和 Guidelines for Using HIV Testing Technologies in Surveillance WHO/CDS/CSR/EDC/ UNAIDS/ ISBN 9713920637對 〈 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 (試行 )〉 進行全面修訂而成 ， 與國際檢測技術和策略緊密接軌 。 ? ：樣品的采集和處理 ， HIV抗體的檢測 （ 目的 、 要點 、 方法及結果報告 ） ,HIVP24抗原檢測 （ 方法 、 結果報告和解釋 ） ， 艾滋病檢測實驗室安全防護等 。 ? VCT(自愿咨詢檢測 )和當前防治工作的需求 ， 新增了以下內容 : HIV抗體檢測的替代策略 ， 嬰幼兒 HIV感染診斷 ， HIV RNA定量測定 （ 病毒載量測定 ） ， CD4+/CD8+ T淋巴細胞檢測 ， 職業(yè)暴露預防和補充實驗室意外事故緊急處理措施 。 ? ， 對每章內容均標明了“ 范圍 ” 和 “ 規(guī)范性引用文件 ” 。 一、 對原有章節(jié)的修改和完善： ? ? （ 1）規(guī)定了樣品的采集和處理適用范圍： 用于 艾滋病病毒（ HIV）檢測的血清、血漿和全血樣品的采集和處理方法，適用于 HIV抗體檢測、抗原檢測、核酸檢測、CD4+/CD8+T淋巴細胞測定和 HIV分離培養(yǎng)。 ? （ 2）應根據(jù)實驗要求選用適當?shù)目鼓齽喝鏑D4+/CD8+T淋巴細胞測定可選用 K3EDTA或肝素或枸櫞酸鈉， HIV病毒分離、核酸定性 /定量檢測可選用 K3EDTA或枸櫞酸鈉。 ? （ 3）樣品的保存 用于 CD4+/CD8+T淋巴細胞測定的樣品不能長期保存，樣品采集時間超過 48h則不可檢測。 ? （ 4） 樣品的運送 ? 應采用 WHO提出的三級包裝系統(tǒng)： ? 第一層容器：裝樣品 ， 要求防滲漏 。 樣品應置于帶蓋的試管內 ， 試管上應有明顯的標記 ， 標明樣品的編號或受檢者姓名 、 種類和采集時間 。 在試管的周圍應墊有緩沖吸水材料 ， 以免碰碎 。 隨樣品應附有送檢單 ， 送檢單應與樣品分開放置 。 ? 第二層容器：要求耐受性好 、 防滲漏 、 容納并保護第一層容器 ， 可以裝若干個第一層容器 。 將試管裝入專用帶蓋的容器內 ， 容器的材料要易于消毒處理 。 ? 第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內 ， 應易于消毒 。 在第三層容器外面要貼標簽 （ 數(shù)量 ， 收 、發(fā)件人 ） 。 ? （ 5） 樣品的接收 ? 打開標本容器時要小心 ， 以防內容物潑濺 。 樣品處理時若內容物有可能濺出 ， 則應在生物安全柜中戴手套進行 。 同時應戴口罩 、防護眼鏡 ， 以防皮膚或粘膜污染 。 ? 如果污染過重或者認為樣品不能被接受 ，則應將樣品安全廢棄 。 并要將樣品情況立即通知送樣人 。 2． HIV抗體的檢測 ? （ 1） HIV抗體的檢測規(guī)定了 HIV抗體的檢測方法 、檢測程序 、 檢測報告及檢測策略；其 適用范圍為： 各級各類醫(yī)療機構 、 疾病預防控制機構 、 檢驗檢疫機構 、 采供血機構及衛(wèi)生保健機構 。 可作為對 HIV感染者 /AIDS病人的診斷 、 報告和處理的實驗室依據(jù) 。 并規(guī)定了規(guī)范性引用文件 。 ? （ 2） HIV抗體檢測實驗室 ? 應符合 《 全國艾滋病檢測工作規(guī)范 （ 1997年版 ） 》 中對檢測實驗室人員 、 建筑設施和設備等條件的要求 。 ? 應符合 《 實驗室生物安全通用要求 》 （ GB 194892022 ） 對 II 級 生 物 安 全 實 驗 室（ BSL2） 的各項要求 。 ? （ 3） HIV抗體檢測的目的和要點 ? HIV抗體檢測的目的： HIV抗體檢測可用于監(jiān)測 、 診斷 、 血液篩查 。 ? 以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群 HIV感染率及其變化趨勢而進行的檢測 ， 檢測的人群包括各類高危人群和一般人群 。 ? 以診斷為目的的檢測是為了確定個體 HIV感染狀況而進行的檢測 ， 包括臨床檢測和自愿咨詢檢測 、 術前檢測 、 根據(jù)特殊需要進行的體檢等 。 ? 以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播 HIV而進行的檢測 ， 包括獻血員篩查和原料血漿篩查 。 ? HIV抗體檢測的要點： ? 篩查試驗陽性不能出陽性報告 。 ? 嚴格遵守實驗室標準操作程序 （ SOP） 。 ? 嚴格按照試劑盒說明書操作 。 ? 注意防止樣品間交叉污染 。 ? （ 4） HIV抗體檢測的篩查方法 ? 常用的篩查方法是酶聯(lián)免疫試驗 （ ELISA） 快速檢測 （ RT） 及其它檢測 ? 隨著對 HIV感染者和 AIDS病人抗逆轉錄病毒治療的進展 ， 及對無癥狀 HIV感染者提供自愿咨詢檢測 （ VCT） 的迫切需求 ， 簡便 、快速的 HIV檢測方法被廣泛應用 。 常用的主要有以下幾種： ? ① 明膠顆粒凝集試驗 （ PA） ： PA是 HIV血清抗體檢測的一種簡便方法 ， 是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體 ， 與待檢樣品作用 ，混勻后保溫 （ 一般為室溫 ） 。 當待檢樣品含有 HIV抗體時 ， 經(jīng)抗原致敏的明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原 抗體反應 ， 根據(jù)明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結果 。 PA試劑有兩種 ， HIV1和 HIV2抗原共同致敏的PA試劑 （ AFD HIV1/2 PA） ， 已經(jīng)我國食品藥品監(jiān)督管理局 （ SFDA） 注冊批準； HIV HIV2抗原分別致敏的 PA試劑 （ SERODIAHIV1/2） 可初步區(qū)分 HIV1型和 HIV2型 ， 目前我國尚未引進 。 ? ② 斑點 EIA（ dotEIA） ：以硝酸纖維膜為載體 ， 將 HIV抗原滴在膜上成點狀 ， 即為固相抗原 。 加血清樣品作用 ， 以后步驟同ELISA。 陽性結果在膜上抗原部位顯示出有色斑點 。 反應時間在 10 min以內 ， 使用抗原量少 。 ? ③ 斑點免疫膠體金 （ 或膠體硒 ） 快速試驗： 與斑點 EIA相似 ， 也是以硝酸纖維膜為載體 。 區(qū)別在于不用酶標記抗體 ， 而代之以紅色的膠體金（ 或膠體硒 ） A蛋白 ， 用滲濾 （ 或層析 ） 法作為洗滌方法 。 試劑穩(wěn)定 ， 可室溫長期保存 。 試驗時不需任何設備 ， 迅速 、 簡便 、 特異性較好 ， 敏感性約相當于中度敏感的 ELISA， 適用于應急檢測 、 門診急診個體檢測 。 目前已有在國內被 SFDA批準注冊的國外進口試劑和國內產(chǎn)品 。 一般可在 10?30min內判讀結果 。 ? ④ 艾滋病唾液檢測卡： 在硝酸纖維膜上包被人工合成的 HIVgp41/gp36蛋白抗原 ， 可同時檢測含在唾液中的 HIV1/HIV2抗體 ， 原理為酶免疫間接法 。 主要檢測唾液中的 HIV IgA與 IgG抗體 ， 敏感性特異性與 ELISA相近 ， 可避免靜脈穿刺 。 但樣品預處理時間長且售價較高 。 以唾液為樣品測定 HIV抗體的 ELISA、 免疫印跡法 （ WB） 試劑美國 FDA已批準 。 ? ⑤ 其它快速篩查試驗方法：家庭 HIV檢測 （ Home Access System） 等 。 ? 尿液 HIV抗體檢測 1996年美國 FDA首次批準 HIV1尿液 ELISA試劑 ， 我國也正在研制尿液 HIV抗體檢測試劑 。 主要適用于靜脈注射毒品 （ IDUs） 人群和其它高危人群的大面積流行病學調查 、監(jiān)測 。 篩查陽性者仍需采血做確認試驗才能確定 。 （ 5） HIV抗體篩查檢測中初篩和復檢試驗的檢測和報告方法 ? 根據(jù)檢測目的選用符合要求的篩查試劑對樣品進行初篩和重復檢測（復檢）。 ? 初篩試驗：以第三代 ELISA（雙抗原夾心法）為例。 ? 備好試劑盒 、 待檢樣品和外部對照質控血清后 ， 按試劑盒說明書以及質控和安全防護要求進行篩查檢測 。 ? 實驗結果 ? ① 陰性對照 （ NC） ， HIV1陽性對照 （ PC1） ，HIV2陽性對照 （ PC2） NC 必須＜ ， 排除 NC≥ ， 計算 NC平均值 。 ? NC界限范圍： NC均值＜ NC＜ NC均值 。 ? ② 符合以下條件的實驗成立： ? 兩個以上的 NC可用 （ ＜ ） 。 ? PC1NC均值 ≥ ， PC2NC均值 ≥ ? ③ Cut off值 = 陰性對照均值 + ? 小于 Cut off為陰性 ， 大于或等于 Cut off為陽性 ? 4） 報告： ? 對 HIV抗體篩查試驗 ， 呈陰性反應者可出具 “ HIV抗體陰性 ” 報告 （ 可用附表 1） ； ? 對初篩試驗呈陽性反應者不能出陽性報告 ， 可出具 “ HIV抗體待復查 ” 報告 （ 附表 1） 。 ? 如需送上級實驗室進行復測或確認 ， 需要填寫“ HIV抗體復測送檢單 ” （ 附表 2） ， 經(jīng) 1名檢驗人員和 1名具有中級以上技術職稱的人員審核簽字 。送當?shù)匕滩『Y查中心實驗室 ， 再轉送艾滋病確認實驗室 ， 或在本實驗室復檢后直接送確認實驗室 。 ? 復檢試驗：對初篩呈陽性反應的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復檢測 。 如兩種試劑復測均呈陰性反應 ， 則報告 HIV抗體陰性；如均呈陽性反應 ， 或一陰一陽 ， 需送艾滋病確認實驗室進行確認 。 ? 對篩查陰性和陽性者 ， 均需做好檢測后咨詢 。 ? （ 6） HIV抗體確認試驗結果報告 ? 確認試驗由確認實驗室根據(jù)檢測結果出具 “ HIV抗體確認檢測報告單 ” （ 附表 3） ， 報告 HIV抗體陽性 （ +） 、 HIV抗體陰性 （ ） 及 HIV抗體不確定（ 177。 ） 。 ? 符合 HIV1抗體陽性判斷標準 ， 報告 “ HIV1抗體陽性 （ +） ” ， 并按規(guī)定做好檢測后咨詢 、 保密和疫情報告工作 。 ? 符合 HIV抗體陰性判斷標準 ， 報告 “ HIV抗體陰性（ ） ” 。 如果近期有高危行為 ， 如性亂 、 注射毒品等 ， 或有急性流感樣癥狀等情況 ， 為排除因“ 窗口期 ” 而出現(xiàn)的假陰性結果 ， 建議高危行為后 3