【文章內(nèi)容簡介】 檢測及判斷結(jié)果 （ 見 ） 。 使用該策略判斷結(jié)果 ， 陽性報(bào)告須由確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室或以上實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的篩查實(shí)驗(yàn)室出具 。 ? 檢測程序及結(jié)果報(bào)告： ? ① 先用第一種篩查試劑 （ ELISA1） 檢測 ， 出現(xiàn)陰性反應(yīng)報(bào)告 HIV抗體陰性；出現(xiàn)陽性反應(yīng)則報(bào)告 “ HIV抗體待復(fù)查 ” ， 并用第一種和第二種酶聯(lián)試劑 （ ELISA1和 ELISA2） 復(fù)檢 。 ? ② 兩種 ELISA試劑檢測結(jié)果均陰性則報(bào)告 HIV抗體陰性；兩種 ELISA試劑檢測結(jié)果均陽性 ， 且S/CO比值均大于或等于 ， 用第三種篩查試劑 （ 高特異性篩查試劑 ） 檢測 ， 如果第三種試劑檢測結(jié)果為陽性 ， 在符合使用該策略條件的地區(qū)和人群中可以出具 “ HIV1抗體陽性（ +） ” 報(bào)告 ， 使用 “ HIV抗體替代策略檢測報(bào)告單 ” （ 附表 5） 。 ? ③ 下列情況均需做確認(rèn)試驗(yàn) ， 按照確認(rèn)試驗(yàn)的結(jié)果出報(bào)告：兩種 ELISA試劑檢測結(jié)果一陰一陽 、 兩種 ELISA試劑檢測結(jié)果均陽性但一種或二種 S/CO在 ～ 、 第三種篩查試劑檢測結(jié)果為可疑或陰性 。 陽性 不確定 樣品 EL I SA 1 陽性 兩種均陽性 確認(rèn)試驗(yàn) 陰性 二種 S / CO 均≥ 6 一種或二種 S / C O 1 ~ 5 . 9 陽性 陰性或可疑 高特異性篩查試劑 提供陽性咨詢 出具“ H I V 抗體陽性”報(bào)告 提供咨詢 隨訪 陰性 提供陰性咨詢 出具“ H I V 抗體陰性”報(bào)告 EL I SA 1+ EL I SA 2 一陰一陽 兩種均陰性 圖 4 替代策略 Ⅱ （高危人群 VCT檢測策略）檢測流程 ? 3） 替代策略 Ⅲ （ 高流行地區(qū)一般人群及其它地區(qū)各類人群 VCT檢測策略 ， 圖 5） ? 檢測程序及結(jié)果報(bào)告： ? ① 先用一種高敏感性篩查試劑檢測 ， 出現(xiàn)陰性反應(yīng)報(bào)告 HIV抗體陰性；出現(xiàn)陽性則用第二種篩查試劑 （ 高特異性 ） 復(fù)檢 。 ? ② 第二種篩查試劑檢測陰性則用第三種篩查試劑（ 另一種高特異性試劑 ） 檢測；第二種篩查試劑檢測為陽性則按疑似陽性咨詢 ， 建議進(jìn)一步做確認(rèn)試驗(yàn) ， 按確認(rèn)試驗(yàn)的結(jié)果報(bào)告 。 ? ③ 第三種篩查試劑檢測為陰性則報(bào)告 HIV抗體陰性；第三種試劑檢測為陽性按疑似陽性咨詢 ， 建議進(jìn)一步做確認(rèn)試驗(yàn) ， 按確認(rèn)試驗(yàn)的結(jié)果報(bào)告 。 陰性 陽性 樣品 篩查試劑 1（高敏感性） 陽性 陰性 提供陽性咨詢 出具“ H I V 抗體陽性”報(bào)告 提供咨詢 隨訪 提供陰性咨詢 出具“ H I V 抗體陰性”報(bào)告 篩查試劑 2（高特異性） 篩查試劑 3（高特異性） 陽性 陰性 提供疑似陽性咨詢 建議進(jìn)一步做確認(rèn)試驗(yàn) 陽性 不確定 陰性 圖 5 替代策略 Ⅲ （一般人群 VCT策略）的檢測及結(jié)果報(bào)告流程圖 ? HIV感染診斷 （ 根據(jù)替代策略制定 ） ? 嬰兒隨訪和檢測服務(wù)流程 ? 納入當(dāng)?shù)匕滩【C合防治系統(tǒng) ? 嬰兒 9~12月齡進(jìn)行 HIV抗體檢測 ? 視為 HIV抗體（ ）常規(guī)兒童保健 ? 18月齡時(shí)再進(jìn)行 HIV抗體檢測 ? 結(jié)果（ +） ? 用另一種檢測試劑再次檢測 ? 結(jié)果（ ） ? 結(jié)果（ +） ? 結(jié)果（ ） ? 對 HIV（ +）產(chǎn)婦進(jìn)行咨詢，指導(dǎo)人工喂養(yǎng) 對 HI V （ + ）產(chǎn)婦進(jìn)行咨詢，指導(dǎo)人工喂養(yǎng) 嬰兒 9~12 月齡進(jìn)行 HI V 抗體檢測 結(jié)果（ + ） 結(jié)果（ ） 視為 HI V 抗體（ ）常規(guī)兒童保健 18 月齡時(shí)再進(jìn)行 HI V 抗體檢測 用另一種檢測試劑再次檢測 結(jié)果（ ） 結(jié)果（ + ） 結(jié)果（ ） 結(jié)果（ ） 結(jié)果（ ） 結(jié)果（ + ） 用另一種檢測試劑再次檢測 結(jié)果（ + ） 確認(rèn)試驗(yàn) 結(jié)果（ + ） 納入當(dāng)?shù)匕滩【C合防治系統(tǒng) HIV感染診斷 （ 根據(jù)替代策略制定 ） 嬰兒隨訪和檢測服務(wù)流程 3． HIV RNA定量測定（病毒載量測定） （ 1） 實(shí)驗(yàn)室功能分區(qū) 實(shí)驗(yàn)室原則上應(yīng)分為 4個(gè)獨(dú)立工作區(qū) ? 1） 試劑準(zhǔn)備區(qū) 、 樣品處理區(qū) 、 擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) ， 并設(shè)在不同房間 。 前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū) ，后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū) 。 各區(qū)的功能是： ? ① 試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制 、 分裝和保存 。 ? ② 樣品處理區(qū)：樣品登記 、 分裝；核酸提取 、 保存和加樣 。 ? ③ 擴(kuò)增區(qū)：核酸擴(kuò)增 。 ? ④ 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測定 、 結(jié)果分析 、登記及報(bào)告 。 ? 2） 擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開 ， 須使用不同的房間 ， 兩區(qū)之間最好有一定的間隔 。 ? 3） 使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進(jìn)行少量試劑配制 。 ? 4） 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑準(zhǔn)備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)： ? ① 在生物安全柜內(nèi)操作 。 ? ② 每個(gè)實(shí)驗(yàn)人員 、 實(shí)驗(yàn)組分別使用各自的試劑及耗材 。 ? ③ 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用 。 ? ④ 用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實(shí)驗(yàn)前后進(jìn)行清潔及消毒。 ? （ 2） 人員 ? 進(jìn)行 HIV核酸檢測的人員須具有艾滋病實(shí)驗(yàn)室的上崗資格 ， 并接受過省級(jí)以上艾滋病實(shí)驗(yàn)室安全及實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)培訓(xùn) 。 ? （ 3） 設(shè)施和設(shè)備 ? 1） 根據(jù)檢測項(xiàng)目配備相應(yīng)的設(shè)施和設(shè)備 。 ? 2）各區(qū)域的設(shè)施和設(shè)備應(yīng)為區(qū)域性專用，開展特定試驗(yàn)時(shí)應(yīng)根據(jù)要求在相應(yīng)區(qū)域放置專用設(shè)備。 ? 以下是各區(qū)域應(yīng)配備的設(shè)備： ? ① 試劑準(zhǔn)備區(qū)：冰箱 、 潔凈工作臺(tái) 、 離心機(jī) 、 加樣器 、 振蕩器 、 廢棄物容器 。 ? ② 樣品處理區(qū)：冰箱 、 生物安全柜 、 離心機(jī) 、 加樣器 、 振蕩器 、 恒溫水浴 、 上下水設(shè)備 、 廢棄物容器 。 ? ③ 擴(kuò)增區(qū)：核酸擴(kuò)增設(shè)備 、 冰箱 、 離心機(jī) 、 加樣器 、 廢棄物容器 。 ? ④ 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：冰箱 、 離心機(jī) 、 加樣器 、 電泳儀 、 振蕩器 、 恒溫水浴 、 上下水設(shè)備 、 廢棄物容器 、 核酸污染物處理設(shè)備等 。 ? ⑤ 配備 80℃ 冰箱 。 ? 3） 各區(qū)域應(yīng)備有工作人員專用的工作服或一次性工作服 、 帽子和鞋套 ， 必要時(shí)配備防護(hù)眼鏡和 /或口罩 。 ? （ 3） 方法和試劑 ? 1） 方法 ? 常用的 HIV RNA定量測定方法有 : ? 逆轉(zhuǎn)錄 PCR試驗(yàn) （ RTPCR） 。 ? 核酸序列擴(kuò)增試驗(yàn) （ NASBA） 。 ? 分支 DNA雜交試驗(yàn) （ bDNA） 。 ? 不同病毒載量檢測方法的比較見表 2 （ John 、 Joel ,Medical Management of HIV Infection 2022 Edition p15） 表 2 不同病毒載量檢測方法的比較 Roche Bayer b i o M e r i e u x 商品名 A m p l i c o r Versant N u c l i S e n s 技術(shù)原理 RT PCR bDNA NASBA 結(jié)果比較 RT PCR 試驗(yàn)的結(jié)果近似于 或 版 b D N A 試驗(yàn)的結(jié)果 bDNA 2 . 0 版或 3 . 0 版的試驗(yàn)結(jié)果與 R o c h e R T PCR實(shí)驗(yàn)的結(jié)果具有可比性 結(jié)果與 RT P C R 和 b D N A 具有可比性，但支持性資料少于前者 優(yōu)點(diǎn) / 缺點(diǎn) 與 Bayer 的方法相比假陽性較少。 已獲 FDA 批準(zhǔn)。 需要時(shí)間較短。 動(dòng) 態(tài)范圍廣。 已獲 FDA 批準(zhǔn)。 能夠使用組織或體液樣品，例如陰道分泌物。 動(dòng)態(tài)范圍最大。 已獲 FDA 批準(zhǔn)。 動(dòng)態(tài)范圍 標(biāo)準(zhǔn)：（ 版） 400 750 , 0 0 0 c / m l 超敏：（ 版） 50 75 , 0 0 0 c / m l bDNA 3 . 0 版： 75 500 , 0 0 0 c / m l N u c l i s e n s H I V 1 Q T ： 176 3 , 5 0 0 , 0 0 0 c / m l 取決于標(biāo)本量 擴(kuò)增的亞型 版：只有 B 亞型 版： B G A H A G 標(biāo)本量 A m p l i c o r 0 . 2 m l 超敏 0 . 5 m l 1ml 10 μ l 2 ml 抗凝劑 EDTA EDTA EDTA 、肝素、全血、任何體液、PBMC 、精液、組織等 要求 6 小時(shí)之內(nèi)分離血漿，運(yùn)輸前在 20 ℃或 70 ℃冷凍。 4 小時(shí)之內(nèi)分離血漿，運(yùn)輸前在 20 ℃或 70 ℃冷凍。 4 小時(shí)之內(nèi)分離血清或血漿，運(yùn)輸前在 20 ℃或 70 ℃冷凍 ? （ 5） HIV核酸定量檢測的意義 ? 1） 輔助診斷 ? 在一般情況下 ， HIV抗體檢測足以對 HIV感染與否做出正確診斷 ， 但在特殊情況下 ， 單純抗體檢測不足以完成明確的判定 ， 如出現(xiàn)某些非典型的抗體反應(yīng)形式 ， 特別是不確定反應(yīng)時(shí) ，RNA的測定可提供非常有用的證據(jù) 。 雖然單純使用 RNA測定不能完全確定感染與否 ， 但當(dāng) RNA測定出現(xiàn)較高拷貝數(shù)的陽性結(jié)果時(shí) （ 3，000c/ml） ， 感染發(fā)生的可能性非常大 。 ? 需要指出的是 ， 每一種 RNA定量系統(tǒng)都有其最低檢測限 ， 即可以測出的最低拷貝數(shù) ， 通常在50?100c/ml以上 ， RNA定量檢測時(shí)未測出不等于樣品中不含有病毒 RNA。 ? 另外 ， 許多 AIDS病人 /HIV感染者在接受抗病毒治療后其病毒載量可降至非常低的水平 ， 還有少數(shù) HIV感染者在感染后長期處于病毒水平非常低的狀態(tài) ， 進(jìn)行 RNA測定時(shí)往往測不出來 。因此 ， 使用此指標(biāo)應(yīng)綜合其它檢測數(shù)據(jù)和樣品背景情況進(jìn)行綜合判斷 。 ? 2） 早期診斷 ? 在 HIV感染的窗口期無法使用抗體檢測進(jìn)行診斷 。