sod和pod酶活性的變化(已修改)
2025-06-06 23:00 本頁面
【正文】 實驗一、超氧化物岐化酶（ SOD）對逆境的響應(yīng) 一、目的和要求 植物在生命過程中不斷產(chǎn)生活性氧，但同時又形成了一個完善的清除活性氧的防御系統(tǒng)，即酶促系統(tǒng)與非酶促系統(tǒng)，使植物體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生與清除之間維持在一個動態(tài)平衡狀態(tài)。當植物受到脅迫時，這種平衡將可能被破壞，隨著脅迫時間的延長和脅迫程度的加重，活性氧清除系統(tǒng)的功能逐漸降低，活性氧積累得越來越多，最終使細胞膜發(fā)生膜質(zhì)過氧化并發(fā)生自由基鏈式反應(yīng)，形成丙二醛（ MDA），使細胞膜流動性下降，膜功能受到傷害?；钚匝趺复偾宄到y(tǒng)主要有超氧化物歧化酶（ SOD）、過氧化物酶（ POD）、過氧化氫酶（ CAT）、抗壞血酸過氧化物酶（ AsAPOD）等，這些酶活性的高低可在不同程度上反應(yīng)植物抗性的強弱。本試驗通過測定正常生長與逆境下植株超氧化物歧化酶 ( SOD) 、過氧化物酶 (POD)活性，了解逆境下 SOD和 POD酶響應(yīng)的機制。 二、測定方法 氮藍四唑（ NBT）法測定超氧化物岐化酶（ SOD） 【 實驗原理 】 SOD是含金屬輔基的酶。高等植物含有兩種類型的 SOD： Mn－ SOD和－ SOD，它們都催化下列反應(yīng)： 由于超氧自由基（ O2.－ ）為不穩(wěn)定自由基，壽命極短，測定 SOD活性一般為間接方法。并利用各種呈色反應(yīng)來測定 SOD的活力。核黃素在有氧條件下能產(chǎn)生超氧自由基負離子 O2.－ ， 當加入 氮藍四唑 (NBT) 后，在光照條件下，與超氧自由基反應(yīng)生成單甲月替 （ 黃 色 ） ，繼而還原生成二甲月替 ，它是一種藍色物質(zhì)，在 560nm波長下有最大吸收。當加入 SOD時，可以使超氧自由基與 H+結(jié)合生成 H2O2和 O2，從而抑制了 NBT光還原的進行，使藍色二甲月替 生成速度減慢。通過在反應(yīng)液中加入不同量的 SOD酶液，光照一定時間后測定 560nm波長下各液光密度值，抑制 NBT光還原相對百分率與酶活性在一定范圍內(nèi)呈正比。反應(yīng)液藍色愈深，說明酶活性愈低。 三、試劑 1. (PBS， )： A母液 :（ mL）； B母液 :（ mL）； （ ） 的配制： : ，稀釋 2. ：稱取 Met
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