【正文】 ：小核RNA，只存在于細(xì)胞核或者核質(zhì)核仁中的一類小分子量的RNA，具有獨特功能并且獨立存在的實體，約為70300個核苷酸，可參與真核生物的RNA剪接。：即干擾RNA，一類小分子量的RNA，可以高效，特意地阻斷體內(nèi)同源基因的表達(dá)，促使同源mRNA降解，誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定的基因缺失。：一類具有催化活性的核糖核酸，呈錘頭狀，參加RNA的剪切和降解。與RNA酶有顯著區(qū)別，它是RNA，后者是蛋白質(zhì)。，是指能與特定mRNA互補結(jié)合的RNA片段，即堿基序列正好與有意義的mRNA互補的RNA分子。5三鏈DNA：是在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上形成的，由多聚嘧啶核苷酸或者多聚嘌呤核苷酸與DNA雙螺旋形成的。/由于雙螺旋的一股輕微折疊后，該股中的堿基可與雙螺旋的堿基以Hoogsteen氫鍵相連如TAT、CGC、TAA、CGG。：即RNAi干擾，siRNA高效特異地阻斷體內(nèi)同源基因表達(dá)，促使同源RNA降解，誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型的現(xiàn)象。？其功能和醫(yī)學(xué)意義如何？答：又稱為調(diào)節(jié)RNA，是指能與特定mRNA互補結(jié)合的RNA片段，也即堿基序列與有意義的mRNA互補的RNA分子。功能：a阻斷mRNA的翻譯，b抑制DNA復(fù)制和mRNA的轉(zhuǎn)錄，c選擇性的關(guān)閉基因。意義：參與基因調(diào)控：可用于基因治療（病毒、腫瘤）；8什么叫做核酶？如何發(fā)揮作用？有何應(yīng)用價值？答：即一類具有催化活性的核糖核酸。主要催化RNA的剪接反應(yīng)和剪切反應(yīng)。應(yīng)用意義：通過設(shè)計合成特異性切割病毒以及病毒的RNA的核酶，對病毒和腫瘤的基因治療將發(fā)揮重要作用。？其作用機理和應(yīng)用前景如何？答：：即RNAi干擾，siRNA高效特異地阻斷體內(nèi)同源基因表達(dá)，促使同源RNA降解，誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型的現(xiàn)象。作用機理：分為起始階段和效應(yīng)階段。起始階段Dicer酶以依賴ATP的方式切割外源性的雙鏈RNA為小分子干擾RNA，清除病毒，阻斷轉(zhuǎn)座子表達(dá)；效應(yīng)階段小分子干擾RNA結(jié)合核酶復(fù)合物形成RNA誘導(dǎo)活化的復(fù)合物及RISC，然后RISC結(jié)合至mRNA轉(zhuǎn)錄本上并切割它，從而發(fā)揮作用。應(yīng)用前景：大通量研究基因功能的工具；基因敲除中的應(yīng)用；用于基因治療；基因表達(dá)的調(diào)控。第二章 1移動基因：又叫轉(zhuǎn)位因子（transposable elements）,由于它可以在染色體基因組上移動，甚至可在不同染色體間躍遷，故又稱跳躍基因（jumping gene）。2斷裂基因：真核細(xì)胞的結(jié)構(gòu)基因，其核苷酸序列中含有與氨基酸編碼無關(guān)的DNA間隔區(qū)段，從而被分割成不連續(xù)的若干區(qū)域。將這種編碼序列不連續(xù)，有間隔區(qū)段的DNA片斷稱為斷裂基因3 RNA剪接：將斷裂基因的內(nèi)含子刪除和表達(dá)子連接并最終形成成熟mRNA的過程。4 重疊基因：不同基因的核苷酸序列有時為相鄰兩個基因共用，將核苷酸彼此重疊的兩個基因稱為重疊基因。5 假基因：在珠蛋白基因簇各片段核苷酸序列分析時發(fā)現(xiàn)，除了有正常的功能基因之外，還有功能失活的特殊序列片段，它不能行使表達(dá)功能。該類核苷酸序列中存在的無表達(dá)功能的畸變核苷酸序列片段。6 衛(wèi)星DNA：又稱隨體DNA,不編碼蛋白質(zhì)和轉(zhuǎn)錄RNA的小片段高度重復(fù)一類小片段DNA序列，多富含GC堿基在DNA浮力密度實驗中會在主峰旁形成些小峰，形似衛(wèi)星分布而稱之。一般510bp短序列，人類為171bp，保護和穩(wěn)定染色體7 基因組：表示某物種單倍體的總DNA。對于二倍體高等生物其配子的DNA總和即為一組基因組不同生物基因組數(shù)目不同。8 LTR：即長末端重復(fù)序列，為RNA基因組的兩端含有的U3RU5兩個完全相同的正向重復(fù)序列。具隨機整和能力，可用作病毒載體問答：1 什么叫做基因？何謂基因的新概念？基因的主要功能是什么?答：基因就是指編碼有功能蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA分子所必須的全部核酸序列。所謂基因的新概念是隨著近年分子生物實驗技術(shù)的發(fā)展從分子水平上研究基因的結(jié)構(gòu)和功能，提出的移動基因，斷裂基因，重疊基因，假基因等基因的新概念。功能：編碼蛋白質(zhì)或者RNA分子基本遺傳信息的基本遺傳單位，是構(gòu)成DNA的功能單位。？轉(zhuǎn)位的后果如何？答：一種大于2000bp的可以在染色體基因組上移動，甚至可以在不同染色體間跳躍的基因序列，也可以稱為插入因子{IS因子}。轉(zhuǎn)位作用：轉(zhuǎn)位子具有雙向整合特性，可以插入其他基因及自身基因不同位點上的移動方式。后果：可以在細(xì)菌染色體或質(zhì)粒中隨機轉(zhuǎn)移，被插入的基因即失去活性?？梢栽谌旧w或質(zhì)粒的某一IS上脫落轉(zhuǎn)位至另一相同的IS上，引起突變或基因轉(zhuǎn)移。？答：四大里程碑：1944年Oswald報道肺炎球菌轉(zhuǎn)化實驗，明確遺傳物質(zhì)是DNA；1953年James waston和Francis Crick闡明了DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)(半保留復(fù)制及其中心法則)；遺傳密碼子的破譯；基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn)。三大技術(shù)發(fā)明：工具酶的發(fā)明（內(nèi)切酶、合成酶、連接酶）；基因合成和測序（合成儀、測序儀）；PCR技術(shù)（PCR擴增儀）。第三章名詞解釋：1基因表達(dá)：是目的基因DNA在導(dǎo)入的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄成mRNA, 再以mRNA指導(dǎo)翻譯成蛋白質(zhì)。2 啟動子：是位于結(jié)構(gòu)基因上游，轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控所必需的一段DNA序列，內(nèi)含35區(qū)（與σ因子結(jié)合）和10區(qū)（和核心酶結(jié)合）的保守序列。當(dāng)啟動子與全酶結(jié)合后可在+1轉(zhuǎn)錄起始點開始轉(zhuǎn)錄。3 終止子：位于一個基因編碼區(qū)下游提供終止信號的DNA序列，可以被RNA聚合酶識別并發(fā)出停止mRNA合成的信號。4 起始密碼子：編碼多肽鏈的第一位氨基酸的密碼子AUG（或ATG），編碼甲硫氨酸（蛋氨酸）。在細(xì)菌中也有罕見的其實密碼子GUG，編碼纈氨酸。其起始表達(dá)作用AUG＞GUG。5 終止密碼子：有三個密碼子（UAA, UAG，UGA），為終止密碼子，只表示鏈的終止，不表達(dá)氨基酸。問答1外源基因在大腸桿菌中表達(dá)需要的條件有哪些？答：條件：一：外源基因插入序列必須保持有正確的方向和閱讀框架。其遺傳密碼不得缺失、遺漏或錯位及錯碼。否則會導(dǎo)致編碼錯誤的蛋白質(zhì)分子，特別是目的基因序列內(nèi)部應(yīng)不含兩端酶切位點的識別序列；二：原核mRNA聚合酶能夠識別插入的基因，三: 外源基因必須能在大腸桿菌中進行有效轉(zhuǎn)錄（如無內(nèi)含子），轉(zhuǎn)錄后的信使RNA在菌體必須相當(dāng)穩(wěn)定，并且能有效的進行翻譯，轉(zhuǎn)譯的蛋白分子在菌體內(nèi)不至于受菌體蛋白酶的降解2 影響外源基因在大腸桿菌中表達(dá)的因素有哪些？答：包括以下這些因素：啟動子結(jié)構(gòu)對表達(dá)效率的影響；表達(dá)載體的選擇；外源基因中密碼子的作用；mRNA的一級結(jié)構(gòu)與基因表達(dá)；mRNA的二級結(jié)構(gòu)對翻譯起始的影響；mRNA穩(wěn)定性的影響；轉(zhuǎn)錄終止區(qū)對外源基因表達(dá)效率的影響；轉(zhuǎn)錄后的若干因素與基因表達(dá)的關(guān)系；宿主選擇對表達(dá)的影響；培養(yǎng)條件的控制對表達(dá)效率的影響。第四章名詞解釋：1 鋅指結(jié)構(gòu)：由兩個半胱氨酸殘基和兩個組氨酸殘基通過位于中心的鋅離子結(jié)合成一個穩(wěn)定的指狀結(jié)構(gòu)，表面暴露的堿基及其極性氨基酸與DNA結(jié)合有關(guān)。 2 亮氨酸拉鏈：存在與蛋白C末端，—螺旋形成的對稱二聚體，約為30個氨基酸，每兩個亮氨酸之間隔有六個氨基酸，于是每兩圈螺旋就有一個亮氨酸，排成一排，從而在2個α螺旋的蛋白分子之間形成一條拉鏈。3 RNA編輯：是mRNA轉(zhuǎn)錄后因插入，缺失或核苷酸的替換，改變了DNA模板來源的遺傳信息，從而翻譯出氨基酸序列不同的多種蛋白。4增強子：是使啟動子的基因轉(zhuǎn)錄效率顯著提高的一類順式作用元件，其本身不具有啟動子活性，可獨立存在與上游區(qū)、下游區(qū)或基因內(nèi)部，可進行遠(yuǎn)距離增強啟動作用，而且無方向性。問答1 真核表達(dá)調(diào)控的順式作用元件有哪些？其作用特點是什么？ 答：順式作用元件有：啟動子，增強子，沉默子，衰減子，終止子。作用特點：是能夠與DNA結(jié)合蛋白質(zhì)結(jié)合的特定序列的DNA片段，決定轉(zhuǎn)錄起始位點和RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄效應(yīng)。2 真核表達(dá)調(diào)控的反式作用因子有哪些？其作用特點？答：反式作用元件：主要分為通用轉(zhuǎn)錄因子和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子兩大類。作用特點：一，同一DNA序列可被不同蛋白質(zhì)識別；二：同一蛋白質(zhì)因子可與多種不同DNA序列發(fā)生聯(lián)系，多通過蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)先結(jié)合再影響DNA。三：蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)DNA的結(jié)合，導(dǎo)致構(gòu)象上細(xì)微的改變，從而發(fā)揮調(diào)控作用。四：反式作用元件在合成過程中有相當(dāng)大的可變性和可塑性。4 常用的真核表達(dá)載體有哪些？并簡述其特點。答：主要有一下幾種：逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，痘類病毒載體，HSVI單純皰疹病毒載體。特點：一，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體：對細(xì)胞的感染效率高，并能表達(dá)整合的病毒基因；可以同時感染大量細(xì)胞；長時間感染細(xì)胞并不會發(fā)生毒害作用；宿主范圍十分廣泛；可以進行DNA的單拷貝整合；但穩(wěn)定性差，安全性差，重組病毒滴度不高而且局限于感染分裂細(xì)胞。二，痘類病毒載體：對多種細(xì)胞敏感易于培養(yǎng)利于大量生產(chǎn)制備；對外環(huán)境相對穩(wěn)定并易于保存運輸；接種途徑簡單易行；利于多價疫苗的研究開發(fā)；利于大片段的外源性基因的插入，且不影響病毒的正常復(fù)制和表達(dá)，但是基因組分子量大不易操作，沒有mRNA的剪切功能故不宜采用基因組DNA，需使用無內(nèi)含子的cDNA。三，HSVI單純皰疹病毒載體：比較大利于大片段的外源性基因插入提供條件，而且插入容量大；可以感染神經(jīng)細(xì)胞。5 簡述真核，原核倆大表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點？答：一，真核生物DNA只有一小部分是裸露的，有核膜包裹；原核生物大部分屬于非結(jié)合狀態(tài)，且無核膜的阻隔，轉(zhuǎn)錄的mRNA直接在胞質(zhì)中進行蛋白合成。二，真核生物DNA都有內(nèi)含子，可以剪接加以去除；原核生物mRNA的剪接加工能力。三，真核生物可以在需要時可以重排某些DNA片段和擴增特定基因的機制，而原核生物沒有。四，真核生物有三種mRNA酶，可參與不同類型的RNA分子轉(zhuǎn)錄作用，而原核生物只有一種RNA酶。五，真核生物產(chǎn)生的mRNA分子壽命大多比原核生物長。六，真核生物具有對初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的剪接能力。七，真核生物不存在操縱子結(jié)構(gòu)，原核生物多是。八，真核生物基因多拷貝，而原核生物含有很少的重復(fù)序列。第五章名詞解釋：1 限制性核酸內(nèi)切酶：是一類能夠識別雙鏈DNA分子中的某種特定核苷酸序列，并由此切割DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶。2 同尾酶：有一些限制性核酸內(nèi)切酶識別的堿基順序不完全恒定，即識別順序不同，但酶切后產(chǎn)生同樣黏性末端的兩種酶稱為同尾酶，如BamHⅠ和Bgl Ⅱ。 3