抗體制藥pappt課件(已修改)
2025-01-20 04:50 本頁(yè)面
【正文】 第五節(jié) 抗體工程 一、 1890年 Behring發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素為代表，其特點(diǎn) 是用抗原免疫動(dòng)物來獲得多克隆抗體 二、以 1975年 Kohler創(chuàng)建雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗 體為代表。 三、以 1994年 Winter以基因工程方法制備抗體為代 表 四、 1994年 Winter創(chuàng)建了噬菌體抗體庫(kù)技術(shù) 第五節(jié) 抗體工程 抗體分類 ? 多克隆抗體 免疫動(dòng)物 ? 單克隆抗體 雜交瘤技術(shù) ? 基因工程抗體 噬菌體抗體庫(kù)技術(shù) 第五節(jié) 抗體工程 一、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的基本方法 二、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的特點(diǎn) 三、基因工程抗體的表達(dá) 第五節(jié) 抗體工程 一般都是從提取 RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄 PCR獲取抗體某一特定基因區(qū)段，如重鏈和輕鏈可變區(qū)（ VH、 VL）基因。抗體基因的組合形式多為單鏈抗體。 第五節(jié) 抗體工程 現(xiàn)在普遍使用的噬菌粒（ phagemid）載 體，具有噬菌體和質(zhì)粒的共同特點(diǎn)。抗體蛋白和噬菌體外殼蛋白以融合蛋白的形式表達(dá)在載體表面，再感染后，能使目的克隆得以擴(kuò)增。 第五節(jié) 抗體工程 淘篩的基本過程是：抗原固相化后，對(duì)噬菌粒群的吸附、洗滌和洗脫后在感染擴(kuò)增 ，與輔助噬菌體超感染獲得大容量次級(jí)文庫(kù) ，在反復(fù)與抗原吸附，經(jīng)幾輪淘篩后，淘汰了非目的克隆，是目的克隆大量地?cái)U(kuò)增。 第五節(jié) 抗體工程 目的克隆經(jīng)過鑒定后，再導(dǎo)入感受態(tài)菌株，進(jìn)行可溶性表達(dá)，其產(chǎn)物用 Western blot分析確定后，完成全過程。 第五節(jié) 抗體工程 遺傳工程鼠 人抗體鼠： 將小鼠 lg基因滅活，然后轉(zhuǎn)入人 lg基因，生產(chǎn)出人單抗 第五節(jié) 抗體工程 噬菌體抗體庫(kù)技術(shù) 將抗體全套可變區(qū)間基因組裝到噬菌體載體，并 表達(dá)于噬菌體表面，所得到的多樣性噬菌體抗體的集 合，稱為 噬菌體抗體庫(kù) 。 利用噬菌體抗體庫(kù)，篩選并富集特異性抗體的過 程，稱為 噬菌體抗體庫(kù)技術(shù) 。 第五節(jié) 抗體工程 噬菌體抗體庫(kù)的分類 ㈠ 按抗體基因的性質(zhì)分 1. DNA 文庫(kù) 2. cDNA 文庫(kù) ㈡ 按抗體基因的來源分 1. 天然抗體庫(kù)（ native antibodu library） 2. 免疫抗體庫(kù) 3. 半合成抗體庫(kù) 4. 全合成抗體庫(kù) 第五節(jié) 抗體工程 噬菌體展示技術(shù)的原理 第五節(jié) 抗體工程 噬菌體展示技術(shù)是將各種多肽或蛋白質(zhì)以融合蛋白的形式表達(dá)并展示在噬菌體表面，同時(shí)將其遺傳密碼包含于噬菌體內(nèi)部，這使得蛋白質(zhì)的功能與其基因密碼有機(jī)的連接在一起。
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