單克隆抗體ppt課件(已修改)
2025-05-18 13:10 本頁面
【正文】 單克隆抗體 ? 回顧：什么是細胞融合？有什么優(yōu)點或作用？ ? 細胞融合 （ Cell fusion）是指使用人工方法使兩 個或兩個以上的細胞合并形成一個細胞的技術。 ? 體細胞雜交：克服有性不親和性，實現(xiàn)遠源遺傳 重組，在育種方面意義重大。 ? 雜交瘤細胞：具有兩親本特性，生物制藥。 ? 基礎知識回顧 ? 免疫學基礎 ? 1 抗原 ? 進入動物體內(nèi)對肌體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生刺激作用的外源物質(zhì)。 ? 包括：蛋白質(zhì)、多糖、核酸、病毒、細菌、 各種細胞等。 ? 特點：外源性、結構性 （分子具有表面穩(wěn)定的環(huán)狀結構基團作為識別位點）、特異性（抗原與抗體的反應）。 2 抗體 P238 ? 動物免疫系統(tǒng)分泌的中和或消除抗原物質(zhì)的影響的物質(zhì)，存在于血清中，本質(zhì)是免疫球蛋白 （ Immuniiglobbulin,Ig）。 ? 互補性決定區(qū)（ Complementarity determining region， CDR） VH 和 VL的三個高變區(qū)共同組成 Ig的抗原結合部位（ Antigenbinding site）。該部位形成一個與抗原決定簇互補的表面，決定抗體的多樣性與特異性。 多克隆抗體與單克隆抗體 ? 動物脾臟有上百萬個 B淋巴細胞，一個細胞就是一個克隆，它針對抗原上的一個抗原決定族產(chǎn)生的抗體是單克隆抗體。 ? 一種抗原通常具有多個不同的抗原決定族， 因此能刺激多個 B淋巴細胞產(chǎn)生相應的單克隆抗體，因此血清中的抗體是針對不同抗原決定族的單克隆抗體混合物，稱為多克隆抗體。 ? 單克隆抗體和多克隆抗體的比較（見下頁） 比較項目 多克隆抗體 （ PcAb） 單克隆抗體 （ MAb） 免疫原要求 免疫原純度高 ， 抗體純度才能高 不純的免疫原可以獲得高純度抗 體 抗體產(chǎn)生細胞 多克隆性 單克隆性 均質(zhì)性 高度異質(zhì) 高度純質(zhì) 特異性 較高 ， 與抗原上多種決定簇結合 高 ， 與抗原上特定決定簇結合 穩(wěn)定性 較好 相對較差 ， 對理化條件敏感 標準化 較難 ， 不同批次的抗體質(zhì)量差異大 易于標準化 ， 批次間差異小 交叉反應 很常見 ， 難避免非特異性反應 不常見 ， 可避免非特異反應 沉淀反應 有 多數(shù)沒有 實用的血清學試驗 大多數(shù)血清學試驗 一種或多種 ， 需適當選擇 供應量 有限 無限 有效抗體含量 mg/ml 小鼠腹水 mg/ml 無效 Ig含量 mg/ml 體外培養(yǎng)一般沒有 ， 小鼠腹水 mg/ml 其它血清蛋白 存在 體外培養(yǎng)可能有少量小牛血清蛋白 ， 小鼠腹水有少量雜蛋白 ? 3. 干擾素 ? 脊椎動物受多種因素 (如微生物 )誘導產(chǎn)生的一組抗病毒蛋白質(zhì)?？捎绊懠毎倪\動和免疫過程，也可干擾多種病毒的復制而得此名。 ? 分子量數(shù)百至數(shù)千不等。 ? 工程菌表達為主。 問題的引出 ? 血液得到的只能是混合抗體，但是需要大量的僅針對某一個抗原決定族的單克隆抗體，幾乎是不可能的，因此必須采用其他方法。 ? 如果我們能分離得到只分泌某一種特異性抗體的 B淋巴細胞，不就可以大量生產(chǎn)相關單抗了嗎？ ? 問題：可以實現(xiàn)嗎？有什么技術限制嗎？ ? 很難離體培養(yǎng) B淋巴細胞。 （一）歷史發(fā)現(xiàn) ? 1975年，英國劍橋大學分子生物學研究室將已適應于體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細胞與經(jīng)綿羊紅細胞免疫過的小鼠的脾細胞（ B淋巴細胞）進行融合，發(fā)現(xiàn)融合形成的雜交瘤細胞具有雙親細胞的特征：既像骨髓瘤細胞一樣在體外培養(yǎng)中能夠無限地快速增殖，又能持續(xù)地分泌特異性抗體。 病毒誘導制備轉(zhuǎn)化脾細胞 ?有人直接取出健康的活化脾細胞，在培養(yǎng)中加入病毒體外誘導，以獲得能永久生長的特異脾細胞系。 ?這種方法工作量大、難度高，在制備人用單抗時比較有用。 （二）雜交瘤技術 ?將骨髓瘤細胞與免疫的動物脾細胞融合得到既能夠分泌抗體又能在體外長期繁殖的雜交瘤細胞，經(jīng)過克隆化培養(yǎng)得到可以分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞，這種技術通稱為雜交瘤技術（ hydridomatechniquete）。 ? 單克隆抗體的特點是：理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原
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