單克隆抗體ppt課件(已修改)
2025-05-18 13:10 本頁面
【正文】 單克隆抗體 ? 回顧：什么是細(xì)胞融合？有什么優(yōu)點(diǎn)或作用？ ? 細(xì)胞融合 （ Cell fusion）是指使用人工方法使兩 個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。 ? 體細(xì)胞雜交：克服有性不親和性，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)源遺傳 重組，在育種方面意義重大。 ? 雜交瘤細(xì)胞：具有兩親本特性，生物制藥。 ? 基礎(chǔ)知識回顧 ? 免疫學(xué)基礎(chǔ) ? 1 抗原 ? 進(jìn)入動物體內(nèi)對肌體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生刺激作用的外源物質(zhì)。 ? 包括：蛋白質(zhì)、多糖、核酸、病毒、細(xì)菌、 各種細(xì)胞等。 ? 特點(diǎn)：外源性、結(jié)構(gòu)性 （分子具有表面穩(wěn)定的環(huán)狀結(jié)構(gòu)基團(tuán)作為識別位點(diǎn)）、特異性（抗原與抗體的反應(yīng)）。 2 抗體 P238 ? 動物免疫系統(tǒng)分泌的中和或消除抗原物質(zhì)的影響的物質(zhì)，存在于血清中，本質(zhì)是免疫球蛋白 （ Immuniiglobbulin,Ig）。 ? 互補(bǔ)性決定區(qū)（ Complementarity determining region， CDR） VH 和 VL的三個(gè)高變區(qū)共同組成 Ig的抗原結(jié)合部位（ Antigenbinding site）。該部位形成一個(gè)與抗原決定簇互補(bǔ)的表面，決定抗體的多樣性與特異性。 多克隆抗體與單克隆抗體 ? 動物脾臟有上百萬個(gè) B淋巴細(xì)胞，一個(gè)細(xì)胞就是一個(gè)克隆，它針對抗原上的一個(gè)抗原決定族產(chǎn)生的抗體是單克隆抗體。 ? 一種抗原通常具有多個(gè)不同的抗原決定族， 因此能刺激多個(gè) B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的單克隆抗體，因此血清中的抗體是針對不同抗原決定族的單克隆抗體混合物，稱為多克隆抗體。 ? 單克隆抗體和多克隆抗體的比較（見下頁） 比較項(xiàng)目 多克隆抗體 （ PcAb） 單克隆抗體 （ MAb） 免疫原要求 免疫原純度高 ， 抗體純度才能高 不純的免疫原可以獲得高純度抗 體 抗體產(chǎn)生細(xì)胞 多克隆性 單克隆性 均質(zhì)性 高度異質(zhì) 高度純質(zhì) 特異性 較高 ， 與抗原上多種決定簇結(jié)合 高 ， 與抗原上特定決定簇結(jié)合 穩(wěn)定性 較好 相對較差 ， 對理化條件敏感 標(biāo)準(zhǔn)化 較難 ， 不同批次的抗體質(zhì)量差異大 易于標(biāo)準(zhǔn)化 ， 批次間差異小 交叉反應(yīng) 很常見 ， 難避免非特異性反應(yīng) 不常見 ， 可避免非特異反應(yīng) 沉淀反應(yīng) 有 多數(shù)沒有 實(shí)用的血清學(xué)試驗(yàn) 大多數(shù)血清學(xué)試驗(yàn) 一種或多種 ， 需適當(dāng)選擇 供應(yīng)量 有限 無限 有效抗體含量 mg/ml 小鼠腹水 mg/ml 無效 Ig含量 mg/ml 體外培養(yǎng)一般沒有 ， 小鼠腹水 mg/ml 其它血清蛋白 存在 體外培養(yǎng)可能有少量小牛血清蛋白 ， 小鼠腹水有少量雜蛋白 ? 3. 干擾素 ? 脊椎動物受多種因素 (如微生物 )誘導(dǎo)產(chǎn)生的一組抗病毒蛋白質(zhì)?？捎绊懠?xì)胞的運(yùn)動和免疫過程，也可干擾多種病毒的復(fù)制而得此名。 ? 分子量數(shù)百至數(shù)千不等。 ? 工程菌表達(dá)為主。 問題的引出 ? 血液得到的只能是混合抗體，但是需要大量的僅針對某一個(gè)抗原決定族的單克隆抗體，幾乎是不可能的，因此必須采用其他方法。 ? 如果我們能分離得到只分泌某一種特異性抗體的 B淋巴細(xì)胞，不就可以大量生產(chǎn)相關(guān)單抗了嗎？ ? 問題：可以實(shí)現(xiàn)嗎？有什么技術(shù)限制嗎？ ? 很難離體培養(yǎng) B淋巴細(xì)胞。 （一）歷史發(fā)現(xiàn) ? 1975年，英國劍橋大學(xué)分子生物學(xué)研究室將已適應(yīng)于體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)綿羊紅細(xì)胞免疫過的小鼠的脾細(xì)胞（ B淋巴細(xì)胞）進(jìn)行融合，發(fā)現(xiàn)融合形成的雜交瘤細(xì)胞具有雙親細(xì)胞的特征：既像骨髓瘤細(xì)胞一樣在體外培養(yǎng)中能夠無限地快速增殖，又能持續(xù)地分泌特異性抗體。 病毒誘導(dǎo)制備轉(zhuǎn)化脾細(xì)胞 ?有人直接取出健康的活化脾細(xì)胞，在培養(yǎng)中加入病毒體外誘導(dǎo)，以獲得能永久生長的特異脾細(xì)胞系。 ?這種方法工作量大、難度高，在制備人用單抗時(shí)比較有用。 （二）雜交瘤技術(shù) ?將骨髓瘤細(xì)胞與免疫的動物脾細(xì)胞融合得到既能夠分泌抗體又能在體外長期繁殖的雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過克隆化培養(yǎng)得到可以分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，這種技術(shù)通稱為雜交瘤技術(shù)（ hydridomatechniquete）。 ? 單克隆抗體的特點(diǎn)是：理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原
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