動物細胞工程—單克隆抗體制備復習策略(已修改)
2025-09-23 20:36 本頁面
【正文】 ？ ，對取材有何要求？ 實驗材料，藥性、毒性檢測，提取細胞分泌物等 選擇胚胎細胞或幼年動物組織，因為其 分裂增殖能力強 。 ？培養(yǎng)基中的成分有何特點？ 培養(yǎng)基是液體的，成份與 動物內(nèi)環(huán)境 相似。 動物血清 ？ 體溫和 PH都應與 動物體內(nèi)環(huán)境 相似。 動物細胞培養(yǎng) 就是從動物機體中取出相關的組織，將它分散成 單個細胞 ，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。 條件 ？ 液體、營養(yǎng)物質(zhì)（ 血清 ）、 PH、溫度、氣體、無菌等 動物組織塊 細胞懸液 原代培養(yǎng) 傳代培養(yǎng) 胰蛋白酶處理分散成單個細胞 幼齡動物的器官組織；動物胚胎 細胞貼壁 接觸抑制 原代培養(yǎng) 傳代培養(yǎng) 加入培養(yǎng)液 用胰蛋白酶等處理貼壁細胞 適宜條件 不死性細胞 電激處理使供體核進入受體卵母細胞構建重組胚胎 卵母細胞采集、培養(yǎng) MⅡ 期 卵母細胞 供體牛 供體細胞注入去核卵母細胞 代孕母牛 克隆牛 體細胞培養(yǎng) 去核卵母細胞 去核 胚胎 移植 體細胞核移植過程 （體細胞克隆動物） 體細胞核移植技術存在的問題 （ 1）成功率非常低 （ 2）克隆動物以表現(xiàn)早衰、生理缺陷等健康問題 1970年，有兩位科學家 做了一個著名的實驗： 人 — 鼠細胞融合的實驗， 以證明細胞膜上的蛋白 質(zhì)分子是運動的。 人 — 鼠細胞是怎樣實現(xiàn)融合的？動物細胞融合有什么實踐意義呢？ 三、 動物細胞融合與單克隆抗體 ： 是指兩個或兩個以上的細胞融合為一個細胞的過程。 ⑴自然發(fā)生： 受精卵 ⑵人工誘導： 利用誘導劑誘導動物細胞融合 誘導因素：聚乙二醇、 滅活的病毒 或電激等。 仙臺病毒 紫外線 滅活 喪失感染活性（不感染細胞） 保留融合活性（誘導細胞融合） ①什么是 病毒的滅活？ 滅活是指用物理或化學手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結構。 ②滅活病毒誘導細胞融合的原理 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。 因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合 正在融合的 淋巴細胞與骨髓瘤細胞 正在融合的雞血細胞 ⑶ 動物細胞融合的原理： 細胞膜的流動性 把兩個不同的動物細胞放在一起，用滅活的病毒處理細胞，它們先發(fā)生質(zhì)融合，再出現(xiàn)核融合，進而形成雜交細胞。 融合后的雜交細胞經(jīng)過有絲分裂后仍能形成兩個完整的雜交細胞 ： ⑴突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能； ⑵為制造 單克隆抗體 開辟了新途徑 使用相應的抗體檢測乙肝病毒 —— 抗原 醫(yī)院一般怎樣檢測人體內(nèi)是否存在乙肝病毒？ 乙肝病毒模式圖 凡能夠引起機體產(chǎn)生特異性 免疫應答的物質(zhì)叫做抗原 。 ⑴ 什么是抗原？ 例如花粉、病菌、病毒等。有時自身的組織或細胞也會成為抗原，如癌細胞等。 抗原決定簇： 抗原表面具有的某些 特定的化學基團 ，能決定抗原特異性 ，是免疫細胞識別抗原的重要依據(jù)。 各種抗原的決定簇數(shù)目不同，同一抗原的決定簇可能有多種。 ⑵ 什么是 抗體 ？由何種細胞產(chǎn)生？主要分布在哪里 ?起何作用？ 當機體受到抗原刺激劑后由效應 B細胞（漿細胞）產(chǎn)生的，并且能與該抗原發(fā)生 特異性結合 的具有免疫功能的球蛋白 —— 抗體。 抗體分布于血清中，也分布于組織液及外分泌液中。 抗體與相應抗原特異性結合 抗體由何種細胞產(chǎn)生？主要分布在哪里 ? 血清抗體（也稱多克隆抗體） 由 血清 中提取的抗體是由不同淋巴細胞產(chǎn)生的多種抗體的混合物，可達百萬種以上，稱為 多克隆抗體。 特點： 產(chǎn)量低、純度低、特異性差、反應不夠靈敏。 抗原不純 抗體不純 抗原 動物體內(nèi) 刺激 效應 B 抗體 每一個 B淋巴細胞只分泌一種 化學性質(zhì)單一，特異性強的抗體 。 如果利用單個
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