基因探針ppt課件(已修改)
2025-01-20 00:27 本頁(yè)面
【正文】 基因探針 CHEN PU YAN 基因探針 基因探針 又稱 核酸分子雜交技術(shù)，是在 1968年由華盛頓卡內(nèi)基學(xué)院（ Cavnegie Institute of Washington）的 Roy Britten及其同事發(fā)明的。 基因探針 是指能與特定的靶分子序列發(fā)生特異性相互作用的標(biāo)記分子 . ? 也就是指一段能識(shí)別 (與目的序列或靶序列互補(bǔ) )特異性堿基序列 (基因 )的標(biāo)記同位素等標(biāo)記物的單鏈 DNA或 RNA的分子 。 ? 檢測(cè) DNA的技術(shù)稱為 .Southern blot雜交 . ? 檢測(cè) RNA的技術(shù)稱為 . Northern blot雜交 . ? 檢測(cè)蛋白質(zhì)的技術(shù)稱為 .Western blot雜交 . ? 還有 dot blot,原位雜交技術(shù) 等 . 雜交類型 ? 固相雜交 ? 液相雜交 核酸分子雜交 (固相 雜交 ) ? Northern 雜交 ? Southern 雜交 芯片 ? 以上方法決定雜交模板核酸性質(zhì) , ? DNA Southern 雜交 . ? RNA Northern 雜交 探針與核酸雜交的方法 ? 1）斑點(diǎn)雜交 (dotblot) ? 2）菌落 /噬菌斑：轉(zhuǎn)印篩選法 ? 3）組織 /細(xì)胞 (DNA或 RNA)：原位雜交 (in situ hybridization ISH) . ? Southernblot(DNA)、 Northernblot(RNA) ? DNA和 RNA操作基本一樣，只是電泳所用的膠有所不同 (RNA易形成二級(jí)結(jié)構(gòu) ) 探針基因的分離制備 同位素或非同位素標(biāo)記 標(biāo)記基因探針的純化 檢測(cè)樣品核酸制備 雜交膜制備或轉(zhuǎn)印 預(yù) 雜 交 雜 交 洗 膜 圖 33 核酸探針雜交試驗(yàn)全過(guò)程示意圖 （ a） （ b） （ c） （ d ） （ e） 基因組 DNA DNA限制片段 硝酸纖維素濾膜 同探針同源雜交的基因 DNA片段 X光底片 Southern 凝膠轉(zhuǎn)移雜交技術(shù) RNA印跡技術(shù) （ Northern blotting） 1979年， ，是將 RNA分子從電泳凝膠轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜或其他化學(xué)修飾的活性濾紙上，進(jìn)行核酸雜交的一種實(shí)驗(yàn)方法。由于這種方法與薩瑟恩 DNA印跡雜交技術(shù)十分類似 ,所以叫做諾賽恩 RNA印跡技術(shù)（ Northern blotting）。 而將蛋白質(zhì)從電泳凝膠中轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜上，然后同放射性同位素 125I標(biāo)記的特定蛋白質(zhì)之抗體進(jìn)行反應(yīng) ,這種技術(shù)叫做韋斯頓蛋白質(zhì)雜交技術(shù)（ Western blotting）。 ?斑點(diǎn)印跡雜交和狹線印跡雜交 ? 斑點(diǎn)印跡雜交（ dot blotting）和狹線印跡雜交（ slot blotting ）是在 Southern印跡雜交的基礎(chǔ)上發(fā)展的量種類式的快速檢測(cè)特定核酸（ DNA和 RNA）分子的核酸雜交技術(shù)。由于在實(shí)驗(yàn)的加樣過(guò)程中使用了特殊設(shè)計(jì)的加樣裝置，使眾多待測(cè)樣品能夠一次同步轉(zhuǎn)移到雜交濾膜上，并有規(guī)律地排列成點(diǎn)陣或線陣。這兩項(xiàng)技術(shù)更適應(yīng)與核酸樣品的定量檢測(cè)。 檢測(cè)重組體克隆的菌落雜交技術(shù) 菌落雜交 原位雜交 (in situ hybridization ISH) ? 原位核酸分子雜交技術(shù)簡(jiǎn)稱原位雜交 (in situ hybridization ISH)是應(yīng)用已知堿基順序并帶有標(biāo)記物的核酸探針與組織、細(xì)胞中待檢測(cè)的核酸按堿基配對(duì)的原則進(jìn)行特異性結(jié)合而形成雜交體，然后再應(yīng)用與標(biāo)記物相應(yīng)的檢測(cè)系統(tǒng)，通過(guò)組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)方法在被檢測(cè)的核酸原位形成帶顏色的雜交信號(hào)，在顯微鏡或電子顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)定位。 一、基因探針 1） DNA酶切片段 2）用 PCR 擴(kuò)增出的核酸 3）直接用 RNA作探針 4）人工合成（含標(biāo)記） 1. 基因探針的類型 2. 基因探針的要求 1）盡量避免高度重復(fù)序列：根據(jù)目的而定。最好用 cDNA(要將 polyA或 polyT去掉 )。 2） G+C含量： 4060% 3）探針本
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