基因診斷genediagppt課件(已修改)
2025-05-10 22:02 本頁面
【正文】 第 16章 基因診斷 王慧蓮 概述 ? 幾乎所有的疾病均在一定程度上與基因有某種聯(lián)系，基因的改變，或是疾病發(fā)生的原因，或是疾病發(fā)生的結果，或是疾病發(fā)生時的伴隨現(xiàn)象，而這些現(xiàn)象的出現(xiàn)是有規(guī)律的。因此，可以通過檢測基因的改變來反映疾病的發(fā)生和發(fā)展，療效和預后 ? 基因診斷：是以 DNA或 RNA為診斷材料，通過檢查基因的存在、缺陷或表達異常，對人體狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過程。 基因診斷經(jīng)歷了三個基本發(fā)展階段 ? 第一階段：２０ 世紀８０年代，以 DNA分子雜交為基礎，通過限制性片段長度多態(tài)性性（ RFLP)分析進行． ? 第二階段：應用 PCR技術． ? 第三階段：應用基因芯片技術． 第一節(jié) 基因診斷的基礎技術 一 .基因診斷中常用的幾種技術 （一） 核酸雜交 （二） PCR （ 三） DNA序列測定 （四） DNA芯片技術 (一 )核酸分子雜交技術 (1)方法 : 以已知順序核酸片段作為探針 ,經(jīng)放射性或非放射性物質標記后 ,再與未知的目的核酸片段進行雜交反應 ,分離已雜交和未雜交的標記核酸鏈 ,通過標記信號的檢測就可以對未知的目的核酸鏈進行定性、定量分析 . (2)幾種不同形式的核酸分子雜交 a. Southern印跡 (southern blot)雜交 : 用于 DNA的檢測，可用于基因的限制性內切酶譜分析，基因突變分析等． b. Northern印跡 (Northern blot)雜交 : 用于 RNA的檢測，能對組織細胞中的總 RNA 或 mRNA進行定性和定量分析． c. 斑點雜交（ dot blot): 既可以檢測 DNA也可以檢測 RNA,用于特定基因及其表達的定性和定量分析．方法簡單、靈敏；但特異性低． d. 原位雜交（ in situ hybridization): 是細胞學技術與核酸雜交技術結合的一種核酸分析檢測技術．可分為 DNA原位雜交和 RNA原位雜交 ,用于檢測染色體中特定的基因位置，用于染色體疾病的診斷． 分類 : ① 玻片原位雜交 :如中期的染色體和組 織切片 . ② 膜上原位雜交 :將菌落或噬菌斑影印在尼 龍膜 (如硝酸纖維膜 ) 原位雜交的鏡像圖 (二 )PCR技術在基因診斷中的應用 （１）等位基因特異性寡聚核苷酸（ allele specific oligonnucleotide,ASO)探針斑點雜交： PCRASO 該方法是 診斷已知點的突變： 需分別合成野生型和突變型探針．在基因診斷時，只需用 PCR擴增受檢者目的 DNA片段，再分別與上述探針雜交．雜交的結果有如下幾種情況： ① PCR擴增產物與正常探針雜交，不與突變探針雜交 不 存在這種突變； ② 只與突變探針雜交 突變基因為純合子； ③ 與正常探針和突變探針都可雜交 突變基因為雜合子； ④ 與正常探針和突變探針都不能雜交 突變基因不屬于已發(fā) 現(xiàn)的類型 （２）單鏈構象多態(tài)性（ single strand conformation ploymorphism,SSCP)分析 是一種基于單鏈 DNA構象差別來檢測點突變的方 法． DNA變性形成單鏈，在中性條件下長度相同的單 鏈指 DNA,如果堿基組成和 (或 )排列順序不同 ,形成的 構象就不同 ,這樣就形成了單鏈構象多態(tài)性 .這些分子在非變性 PAGE中電泳中表現(xiàn)出不同的遷移率 . SSCP特別適于分析小于 400bp 的 PCR產物。據(jù)認為 SSCP可以區(qū)分 1bp的差異 PCRSSCP分析不能確定基因變異的內容，因此電泳后結果有差異后還需進行測序分析，確定變異性質 (3)限制性片段長度多態(tài)性（ restriction fragment length polymorphisms,RFLP） 分析 ? 基因突變導致的基因堿基組成或 (和 )順序發(fā)生改變 ,會在基因結構中產生新的限制性內切酶位點或使原有的位點消失 . 用限制酶對不同個體基因組進行消化時，其電泳條帶的數(shù)目和大小就會產生改變，根據(jù)這些改變可以判斷出突變是否存在 . 限制性片段長度多態(tài)性 RFLPs ( restriction fragment
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1