基因診斷genediagppt課件(存儲(chǔ)版)
【正文】 是由新型變異冠狀病毒 (SARSCoV)感染引起 . SARSCoV基因組為正鏈單股 RNA,有 11個(gè)開(kāi)放閱讀框 ,基因組的特異保守序列為編碼 RNA聚合酶的序列 . 基因診斷方法 : ① 采用 RTPCR技術(shù)擴(kuò)增保守序列 ② DNA芯片 二 .診斷細(xì)菌感染性的疾病 用 PCR技術(shù)通過(guò)對(duì)致病細(xì)菌所含質(zhì)粒的特異序列 ,設(shè)計(jì)引物 ,檢測(cè)引起的疾病的細(xì)菌類型 . 第五節(jié) 基因診斷存在的問(wèn)題與發(fā)展前景 一 .基因診斷技術(shù)應(yīng)用存在的問(wèn)題 目前找到的致病基因不多 ,由多基因及基因 與環(huán)境互作所引發(fā)多種疾病的分子機(jī)制還不 清楚 設(shè)備條件 。 ②導(dǎo)致腫瘤標(biāo)記物產(chǎn)生或含量改變分子機(jī)制不清楚，可用 RTPCR技術(shù)檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物 mRNA的存在或含量的改變。 通過(guò)檢測(cè)癌基因和抑癌基因診斷腫瘤（續(xù)） 2 .P53基因與腫瘤 ： p53基因是最常被失活的抑癌基 因，失活的分子機(jī)制主要是基因突變，也有因?yàn)榛? 因表達(dá)異常而使 p53失活，約 50%以上的惡性腫瘤有 p53基因突變。 ⑤ 易于進(jìn)行自動(dòng)化分析，縮短了研究時(shí)間 . 一 . 血紅蛋白病的基因診斷 分為異常血紅蛋白病和地中海貧血 ,前者是由于珠蛋白的基因突變；后者是由于珠蛋白合成速率降低，a鏈和 b鏈合成不平衡。 定義 :主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的 DNA序列多態(tài)性。 診斷方法：根據(jù)突變的基因序列設(shè)計(jì)探針 . 二 .通過(guò)連鎖遺傳標(biāo)志檢測(cè)診斷疾病 許多基因病，雖然它們的基因結(jié)構(gòu)還沒(méi)有闡明，但通過(guò)染色體分析已被定位在染色體的特定位置上，這些基因是通過(guò)檢測(cè)與特定染色體位點(diǎn)連鎖的遺傳標(biāo)記來(lái)發(fā)現(xiàn)的?；?qū)?PCR產(chǎn)物克隆到載體上 ,抽取質(zhì)粒 ,經(jīng)過(guò)測(cè)量濃度和拷貝數(shù)可準(zhǔn)確定量 .優(yōu)點(diǎn) :穩(wěn)定 ,準(zhǔn)確 . ② .相對(duì)定量 :指在測(cè)定目的基因的同時(shí)測(cè)定一內(nèi)源性管家基因 (如 β actin, rRNA等 ),該管家基因主要是用于核苷酸的拷貝數(shù)的比較 ,反映反應(yīng)體系內(nèi)是否存在 PCR擴(kuò)增的影響因素 . (三） DNA序列測(cè)序 ? 1977年 Sanger創(chuàng)建的鏈終止反應(yīng)序列測(cè)序法 用放射性同位素標(biāo)記引物，用 雙脫氧核苷酸 隨機(jī)終止 DNA鏈的延伸，產(chǎn)生長(zhǎng)度不同的 DNA片段，再用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離這些片段，放射自顯影讀出結(jié)果。因此，可以通過(guò)檢測(cè)基因的改變來(lái)反映疾病的發(fā)生和發(fā)展，療效和預(yù)后 ? 基因診斷：是以 DNA或 RNA為診斷材料，通過(guò)檢查基因的存在、缺陷或表達(dá)異常，對(duì)人體狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過(guò)程。 用熒光標(biāo)記待測(cè)樣品（ DNA,cDNA,RNA)與位于芯片上的核酸探針雜交后，通過(guò)激光共聚焦熒光掃描系統(tǒng)檢測(cè)雜交信號(hào)強(qiáng)度，再用特定的軟件對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行綜合分析，就能獲得待測(cè)樣品的大量基因序列信息或表達(dá)信息。 三 .通過(guò)與疾病相關(guān)的克隆建立疾病基因診斷指標(biāo) 4060年代 : 功能克隆 ,即基于明顯可見(jiàn)的或直接與生化功能相關(guān)的線索確定與疾病相關(guān)的基因 : 如苯丙酮尿癥與鐮刀型的貧血病等 . 7080年代 :定位克隆 ,即基于疾病 染色體 基因的反向遺傳學(xué)策略對(duì)沒(méi)有明顯的表型或生化功能異常的疾病 . 90 今 :表型克隆 ,不考慮基因在染色體上的位置信息 ,而是直接在疾病與正常樣本之間尋找分子水平上的差異 . 利用表型克隆診斷疾病 表型克?。簩?duì)疾病相關(guān)的一組基因進(jìn)行克隆 一些多基因，多因素的疾病，如：肥胖，哮喘，高血壓，冠心病，腫瘤，精神病，自體免疫性疾病等，由于疾病發(fā)生的原因復(fù)雜，不僅涉及多基因互作，還涉及基因與環(huán)境互作。 1996年， Lander報(bào)道了用單核苷酸多態(tài)性 標(biāo)記制備第三代遺傳連鎖圖的遺傳標(biāo)記。DMD相對(duì)更為常見(jiàn)。 三 .通過(guò)檢測(cè)腫瘤相關(guān)病毒診斷腫瘤 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種病毒與腫瘤的發(fā)生有關(guān)，它們有 DNA病毒，也有 RNA病毒 ,其中逆轉(zhuǎn)錄病毒(retrovirus)對(duì)動(dòng)物細(xì)胞的致瘤作用已得到公認(rèn) .還發(fā)現(xiàn)一些與人腫瘤發(fā)生有關(guān)的病毒如 : Burkitt 淋巴瘤 人類乳頭瘤病毒 (HPV) 宮頸癌 通過(guò)檢測(cè)這些病毒的基因就可以幫助診斷相應(yīng)的腫瘤 . EB病毒 四 .通過(guò)檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物基因或 mRNA診斷腫瘤 腫瘤標(biāo)志物
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