色譜分析中國藥科大學(xué)第5章現(xiàn)代色譜技術(shù)簡介(已修改)
2025-01-18 23:17 本頁面
【正文】 第五章 現(xiàn)代色譜技術(shù)簡介 第一節(jié) 高效毛細管電泳分析法 （ high performance capillary electrophoresis, HPCE） 一、 概述 發(fā)展 1937 年， Tiselius(瑞典 )將蛋白質(zhì)混合液放在兩段緩沖溶液之間，兩端施以電壓進行自由溶液電泳 —— 第一次的自由溶液電泳。 1981 年， Jenson 和 Luckas，用 75m 內(nèi)徑石英毛細管進行電泳分析，柱效高達 40萬 /m，促進電泳技術(shù)發(fā)生了根本變革，迅速發(fā)展成為可與 GC、 HPLC 相媲美的嶄新的分離分析技術(shù) —— 高效毛細管電泳分析法。 特點 ① 儀器簡單、易自動化 ② 分析速度快、分離效率高 ③ 操作方便、消耗少 ④ 應(yīng)用范圍極廣 二、 高效毛細管電泳理論基礎(chǔ) 高效毛細管電泳 (HPCE)基本原理 電泳：帶電離子在電場中的定向移動，不同離子具有不同的遷移速度。 當(dāng)帶電離子以速度 v 在電場中移動時，受到大小相等、方向相反的電場推動力和平動摩擦阻力的作用。 電場力： EF qE? 阻力： F fv? 故： qE fv? q 離子所帶的有效電荷； E 電場強度； v 離子在電場中的遷移速度； f 平動摩擦系數(shù) ( 對于球形離子： 6f ???? ,? 離子的表觀液態(tài)動力學(xué)半徑； ? 介質(zhì)的粘度 )。所以，遷移速度： 6πqE qvEf ???? 淌度（ mobility） ? ：單位電場強度下的平均電泳速度。 6πvqE? ???? 淌度不同是電泳分離的基礎(chǔ)。 電滲現(xiàn)象與電滲流 (1) 電滲流現(xiàn)象 當(dāng)液體兩端施加電壓時，就會發(fā)生液體相對于固體表面的移動，這種液體相對于固體表面的移動的現(xiàn)象叫電滲現(xiàn)象。電滲現(xiàn)象中整體移動著的液體叫電 滲流（ electroosmotic flow ，簡稱 EOF）。 (2) HPCE 中電滲流的大小與方向 電滲流的大小用電滲流速度 V 電滲流 表示，取決于電滲淌度 ? 和電場強度 E 。 電滲流的方向取決于毛細管內(nèi)表面電荷的性質(zhì)： ① 內(nèi)表面帶負電荷，溶液帶正電荷，電滲流流向陰極； ② 內(nèi)表面帶正負電荷，溶液帶負電荷，電滲流流向陽極； ③ 石英毛細管；帶負電荷，電滲流流向陰極； (3) HPCE 中電滲流的流形 電荷均勻分布，整體移動，電滲流的流動 為平流，塞式流動（譜帶展寬很?。? 液相色譜中的溶液流動為層流，拋物線流型，管壁處流速為零，管中心處的速度為平均速度的 2 倍（引起譜帶展寬較大）。 (4) HPCE 中電滲流的作用
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