sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量(已修改)
2025-05-26 13:15 本頁面
【正文】 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量 SDS聚丙稀酰胺凝膠電泳技術(shù)是動物生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)教學(xué)中一個重要實(shí)驗(yàn)之一。 能夠帶動生化實(shí)驗(yàn)技術(shù)綜合型實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的開設(shè)。 如：蛋白質(zhì)鹽析沉淀提取 → 葡聚糖凝膠層析分離 → DEAE纖維素分離提純蛋白質(zhì) → 蛋白質(zhì)純度鑒定、蛋白質(zhì)分子量測定等。 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? 通過該實(shí)驗(yàn)使學(xué)生掌握 SDSPAGE測定蛋白質(zhì)分子量的原理； ? 掌握該技術(shù)的操作方法 （ 基礎(chǔ)性很強(qiáng) ， 使用范圍寬闊 ； ? 運(yùn)用 SDSPAGE測定蛋白質(zhì)分子量及染色鑒定 。 二、實(shí)驗(yàn)原理 ? 帶電質(zhì)點(diǎn)在電場中向帶有異相電荷的電極移動 ，這種現(xiàn)象稱為 電泳 。 ? 電泳分類：移動界面電泳 、 區(qū)帶電泳等 。 ? 區(qū)帶電泳 是在半固相或膠狀介質(zhì)上加一個點(diǎn)或一薄層樣品溶液 ， 然后加電場 ， 分子在支持介質(zhì)上或支持介質(zhì)中遷移 。 區(qū)帶電泳使用不同的支持介質(zhì)，有濾紙、纖維素粉、聚氯乙烯樹脂、淀粉凝膠、瓊脂凝膠、醋酸纖維素膜，現(xiàn)在則多用 聚丙烯酰胺（ PAGE） 和瓊脂糖凝膠。 （ 一 ） 分類 PAGE根據(jù)其有無濃縮效應(yīng) ， 分為連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng) 兩大類： 1. 連續(xù)系統(tǒng)： 電泳體系中緩沖液pH值及凝膠濃度相同 ， 帶電顆粒在電場作用下 ， 主要靠電荷和分子篩效應(yīng) 。 ：由于緩沖液離子成分 、 pH、 凝膠濃度及電位梯度的不連續(xù)性 ， 帶電顆粒在 電場中泳動不僅有電荷效應(yīng) ， 分子篩效應(yīng) ， 還具有濃縮效應(yīng) ， 因而其分離條帶清晰度及分辨率均較前者佳 。 （ 二 ） 特點(diǎn)： SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 ， 是在 聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進(jìn) SDS（ 十二 烷基磺酸鈉 ） 。 蛋白質(zhì)在一定濃度的含有強(qiáng)還原劑的 SDS溶液中 ， 與 SDS分子按比例結(jié)合 ，形成帶負(fù)電荷的 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物 。 蛋白質(zhì)喪失了原有
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