實(shí)驗(yàn)七聚丙烯酰胺凝膠柱狀電泳分離血清蛋白(已修改)
2025-06-07 07:01 本頁面
【正文】 實(shí)驗(yàn)六 聚丙烯酰胺凝膠柱狀電泳分離血清蛋白質(zhì) 指導(dǎo)教師 劉建昌、池雪林 一、目的 ? 掌握聚丙烯酰胺凝膠柱狀電泳的原理、操作方法。 ? 學(xué)會(huì)用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)。 二、原理 ? “不連續(xù)系統(tǒng)”最大的特點(diǎn)在于大大提高了樣品分離的分辨率，這種電泳的主要特點(diǎn)是：（ 1）使用兩種不同濃度的凝膠系統(tǒng)；（ 2）配制 兩種凝膠的緩沖溶液成分及 PH值不同；（ 3）配膠緩沖液與電泳槽中電泳緩沖液的成分、 PH值也不相同。在實(shí)驗(yàn)中，電泳凝膠分為兩層：上層膠為低濃度的大孔膠，稱為濃縮膠，成膠的緩沖液是 TrisHCL， ；下層膠則是高濃度的小孔膠，稱為分離膠，成膠的緩沖液是 TrisHCL,。電極緩沖液則是 Tris甘氨酸， ?？梢姡z濃度、成膠成分、 PH值與電泳緩沖液系統(tǒng)各不相同，形成了一個(gè)不連續(xù)系統(tǒng)。 ? 在不連續(xù)系統(tǒng)中電泳時(shí)，甘氨酸、蛋白質(zhì)、鹽酸中的氯離子和溴酚藍(lán)等均解離為陰離子，形成離子流向陽極泳動(dòng)。當(dāng)電極緩沖液（ ）中的甘氨酸離子進(jìn)入濃縮膠時(shí)， pH值降到接近于甘氨酸等電點(diǎn)（ ），于是甘氨酸的解離度突然降低，所帶電荷明顯減少，遷移率減慢。樣品中蛋白質(zhì)成分也進(jìn)入濃縮膠， pH值的改變雖對其解離度有影響，但比對甘氨酸小得多，其遷移率比甘氨酸要大，而且濃縮膠的膠孔較大對蛋白質(zhì)分子不會(huì)造成阻礙。濃縮膠中的 TrisHCl中 Cl離子則全部解離，其遷移率最快。于是在濃縮膠中各種離子的遷移率形成：甘氨酸
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