sds聚丙烯酰胺凝膠電泳(1)(已修改)
2025-05-26 13:12 本頁(yè)面
【正文】 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（ PAGE） 測(cè)定蛋白質(zhì)分子量 一 . 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ?學(xué)習(xí) SDSPAGE測(cè)定蛋白質(zhì)分子量的原理 。 ?掌握垂直板電泳的操作方法 。 ?運(yùn)用 SDSPAGE測(cè)定蛋白質(zhì)分子量及染色鑒定 。 二 .實(shí)驗(yàn)原理 ? 帶電質(zhì)點(diǎn)在電場(chǎng)中向帶有異相電荷的電極移動(dòng) ， 這種現(xiàn)象稱(chēng)為電泳 。 ? 電泳分類(lèi)：移動(dòng)界面電泳 、 區(qū)帶電泳 。 ? 區(qū)帶電泳是在半固相或膠狀介質(zhì)上加一個(gè)點(diǎn)或一薄層樣品溶液 ， 然后加電場(chǎng) ， 分子在支持介質(zhì)上或 支持介質(zhì)中遷移 。 支持介質(zhì)的作用主要是為了防止機(jī)械干擾和由于溫度變化以及大分子溶液的高密度而產(chǎn)生的對(duì)流 。 ? 區(qū)帶電泳使用不同的支持介質(zhì) ， 早期有濾紙 、 玻璃珠 、淀粉粒 、 纖維素粉 、 海砂 、 海綿 、 聚氯乙烯樹(shù)脂；以后有淀粉凝膠 、 瓊脂凝膠 、 醋酸纖維素膜 ， 現(xiàn)在則多用聚丙烯酰胺 （ PAGE） 和瓊脂糖凝膠 。 ? PAGE根據(jù)其有無(wú) 濃縮效應(yīng) ， 分為 連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng) 兩大類(lèi) ， 連續(xù)系統(tǒng)電泳體系中緩沖液 pH值及凝膠濃度相同 ， 帶電顆粒在電場(chǎng)作用下 ， 主要靠電荷和分子篩效應(yīng) 。不連續(xù)系統(tǒng)中由于緩沖液離子成分 ， pH，凝膠濃度及 電位梯度的不連續(xù)性 ， 帶電顆粒在電場(chǎng)中泳動(dòng)不僅有電荷效應(yīng) ， 分子篩效應(yīng) ， 還具有濃縮效應(yīng) ， 因而其分離條帶清晰度及分辨率均較前者佳 。 低電荷密度區(qū) 濃縮膠 膠孔大小，電壓梯度電荷分布不均勻?qū)е碌碾妷禾荻茸兓祀x子、慢離子 分離膠 Ph= Ph= 電泳緩沖液由 Tris 、甘氨酸、 cl、SDS組成 ,甘氨酸等電點(diǎn) = U=IR F=EQ=U/D*Q ? SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 ， 是在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進(jìn) SDS（ 十二烷基磺酸鈉 ） ， SDS能斷裂分子內(nèi)和分子間氫鍵 ， 破壞蛋白質(zhì)的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu) ， 強(qiáng)還原劑能使半胱氨酸之間的二硫鍵斷裂 ， 蛋白質(zhì)在一定濃度的含有強(qiáng)還原劑的 SDS溶液中 ， 與 SDS分子按比例結(jié)合 ， 形成帶負(fù)電荷的 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物 ，
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