實(shí)驗(yàn)八sds-聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳分離蛋白質(zhì)(已修改)
2024-10-15 09:14 本頁面
【正文】 實(shí)驗(yàn)八 SDS－ 聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳分離蛋白質(zhì) 一、目的要求 SDS－聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳分離蛋白質(zhì)技術(shù) 二 、 原理 聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺 (acrylamide，簡稱 Acr)和交聯(lián)劑 N,N甲叉雙丙烯酰胺 (N， N—methylenebisacylamide， 簡稱 Bis)在加速劑 N， N，N?， N?—四甲基乙二胺 (N， N， N?， N?—tetramethyl ethylenedia mine， 簡稱 TEMED)和催化劑過硫酸銨(ammonium persulfate (NH4)2S2O8， 簡稱 AP)或核黃素 (ribofavin即 vita min B2， C17H20O6N4)的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠 ， 以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳 (polyacrylamide gel electrophoresis， 簡稱 PAGE)。 ? 聚丙烯酰胺凝膠有下列特性： (1)在一定濃度時，凝膠透明，有彈性，機(jī)械性能好； (2)化學(xué)性能穩(wěn)定，與被分離物不起化學(xué)反應(yīng)，在很多溶劑中不溶； (3)對 pH和溫度變化較穩(wěn)定； (4)幾乎無吸附和電滲作用，只要 Acr純度高，操作條件一致，則樣品分離重復(fù)性好； (5)樣品不易擴(kuò)散，且用量少，其靈敏度可達(dá) 106g (6)凝膠孔徑可調(diào)節(jié)，根據(jù)被分離物的分子量選擇合適的濃度，通過改變單體及交聯(lián)劑的濃度調(diào)節(jié)凝膠的孔徑； (7)分辨率高，尤其在不連續(xù)凝膠電泳中，集濃縮、分子篩和電荷效應(yīng)為一體。因而較醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂糖電泳等有更高的分辨率。 ? 凝膠濃度 (T)的選擇與被分離物質(zhì)分子量密切相關(guān) 。 表 分子量范圍與凝膠濃度的關(guān)系 分子量范圍 適用的凝膠濃度 /(%) 蛋 白 質(zhì)
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