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浙江大學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)甲sds—聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量(已修改)

2025-01-28 05:47 本頁(yè)面
 

【正文】 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳法 測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 ?、 原理 ? 電泳法分離 、 檢測(cè)蛋白質(zhì)混合樣品 , 主要是根據(jù)各蛋白質(zhì)組分的分子大小和形狀以及所帶靜電荷的多少等因素所造成的電泳遷移率的差別 。 蛋白質(zhì)分子在外加電場(chǎng)下的泳動(dòng)行為可用下列函數(shù)式表示: EQ V = 6π rη v:分子泳動(dòng)速度 Q :分子所帶凈電荷 E:電場(chǎng)強(qiáng)度 r :分子半徑 η : 介質(zhì)粘度 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳法 測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 ? 如果在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中 , 加入一定量的十二烷基磺酸鈉 ( SDS) , 則蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率主要取決于它的分子量的大小 , 而其它因素對(duì)電泳遷移率的影響幾乎可以忽略不計(jì) 。 ? SDS是一種陰離子去污劑 , 它在水溶液中以單體和分子團(tuán)的混合形式存在 。 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳法 測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 ? 這種陰離子去污劑能破壞蛋白質(zhì)分子之間以及與其它物質(zhì)分子之間的非共價(jià)鍵 , 使蛋白質(zhì)變性而改變?cè)械目臻g構(gòu)象 , 特別是在強(qiáng)還原劑 , 如巰基乙醇存在下 , 由于蛋白質(zhì)分子內(nèi)的二硫鍵被還原 , 從而保證了蛋白質(zhì)分子與 SDS能充分結(jié)合 , 形成帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物 。 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳法 測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 ? 這種復(fù)合物由于結(jié)合了大量的 SDS, 使蛋白質(zhì)喪失了原有的電荷狀態(tài) , 形成了僅保持原有分子大小為特征的負(fù)離子團(tuán)塊 , 從而降低或消除了各種蛋白質(zhì)分子之間天然的電荷差異 。 ? SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合后 , 還會(huì)引起蛋白質(zhì)分子發(fā)生構(gòu)象的改變 , 使蛋白質(zhì)復(fù)合物在水溶液中的形狀近似于
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