【正文】 重可以反映動物中毒后的整體變化。 體重改變的原因很多，若化學(xué)毒物刺激或損傷消化道可出現(xiàn)試驗動物飲食減少甚至拒食，表現(xiàn)為體重減輕。若化學(xué)毒物引起腹瀉，將影響食物吸收和利用，體重也會減輕。如果化學(xué)毒物影響水的攝取或腎功能急性損傷，也可能在體重上反映出來。所以，對存活動物尤其是對低于 LD50劑量組的存活動物．應(yīng)在觀察期 14天內(nèi)稱量其體重的變化．以便了解受試物引起毒效應(yīng)的持續(xù)時間。 急性毒性作用 9/15/2020 20 二、急性毒性試驗 ? （五）試驗周期與毒效應(yīng)觀察 : ? : ?急性毒性試驗中，對死亡的動物均應(yīng)及時進行大體解剖和病理組織學(xué)檢查，肉眼觀察主要臟器的大體病理變化，如臟器大小、外觀、色澤的變化，有無充血、出血、水腫或其它改變，對有改變的臟器進行取材做組織病理學(xué)檢查。對存活動物在觀察期結(jié)束時進行大體病理檢查．必要時做組織病理學(xué)檢查。根據(jù)試驗需要可進一步擴大觀察項目．如體溫、心電圖、腦電圖或進行某些生化指標(biāo)測定等。 急性毒性作用 9/15/2020 21 二、急性毒性試驗 ? （ 五）試驗周期與毒效應(yīng)觀察 ? ?重點觀察和記錄每只動物死亡的時間，特別是最早出現(xiàn)死亡的時間以及各個劑量組動物的死亡數(shù)。分析中毒死亡時間的規(guī)律具有一定意義，可為深人研究化學(xué)物的毒作用機制提供參考。 急性毒性作用 9/15/2020 22 二、急性毒性試驗 ? (六 )經(jīng)典急性毒性試驗的局限性 ? ? ? LD50僅僅是一個近似值 ? 癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學(xué)、血液學(xué)及其它化驗檢查所提供的深入細致的毒性信息。 急性毒性作用 9/15/2020 23 三、急性毒性評價 外源化學(xué)物急性毒性分級（ WHO） 毒性分級 大鼠一次經(jīng)口 LD50 (mg/kg) 6只大鼠吸入 4小時，死亡 2~4只的濃度 (ppm) 兔經(jīng)皮LD50(/mg/kg) 對人可能致死的估計量 g/kg 總量 (g/60kg) 劇毒 1 10 5 高毒 1~ 10~ 5~ ~ 3 中等毒 50~ 100~ 44~ ~ 30 低毒 500~ 1000~ 350~ 5~ 250 實際無毒 5000~ 10000~ 2180~ 15 1000 急性毒性作用 9/15/2020 24 三、急性毒性評價 我國食品毒理急性毒性分級法 (1994) 急性毒性分級 大鼠經(jīng)口 LD50(mg/kg) 大致相當(dāng)于 70kg人的致死量 6級 (極毒 ) 1 稍嘗 ,7滴 5級 (劇毒 ) 1~50 7滴 ~1茶匙 4級 (中等毒 ) 51~500 1茶匙 ~35克 3級 (低毒 ) 501~5000 35~350克 2級 (實際無毒 ) 5001~15000 350~1050克 1級 (無毒 ) 15000 1050克 急性毒性作用 9/15/2020 25 ? 一、 基本概念 ? 二 、 蓄積毒性試驗方法及其評價 蓄積作用及其評價 167。 2 蓄積毒性 9/15/2020 26 化學(xué)毒物進入機體后，經(jīng)過生物轉(zhuǎn)化以代謝產(chǎn)物或化學(xué)物原型排出體外。但是，當(dāng)化學(xué)毒物反復(fù)多次給動物染毒，化學(xué)毒物進入機體的速度 (或總量 )超過代謝轉(zhuǎn)化的速度和排泄的速度 (或總量 )時，化學(xué)毒物或其代謝產(chǎn)物就有可能在機體內(nèi)逐漸增加并貯留，這種現(xiàn)象稱為化學(xué)毒物的 蓄積作用 (accumulation)。 蓄積作用及其評價 一、基本概念 9/15/2020 27 蓄積作用實際上有二個含義： 物質(zhì)蓄積 (material accumulation) 功能蓄積 (functional accumulation) 蓄積作用及其評價 一、基本概念 9/15/2020 28 二、蓄積毒性試驗方法及其評價 ? 化學(xué)毒物的 蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質(zhì)基礎(chǔ) ，因此研究化學(xué)毒物在機體內(nèi)的蓄積性是評價化學(xué)毒物能否引起潛在慢性毒性的依據(jù)之一 ， 也是衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)制訂過程選擇安全系數(shù)的主要依據(jù) 。 ? 蓄積毒性試驗是研究化學(xué)毒物基礎(chǔ)毒性的重要內(nèi)容之一 ， 目的是通過試驗求出蓄積系數(shù) K， 了解化學(xué)毒物蓄積毒性的強弱 ， 并為慢性毒性試驗及其他有關(guān)毒性試驗的劑量選擇提供參考 。 蓄積作用及其評價 9/15/2020 29 ? (一 )蓄積系數(shù)法 ? 蓄積系數(shù) (accumulation coefficient)是多次染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)效應(yīng) (或死亡 )的累積劑量[ED50(n)]與一次染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)相同效應(yīng)(或死亡 )的劑量 [ED50(1)]的比值 ， 即： K＝ ED50(n)/ED50(1) K＝ LD50(n)/LD50(1) 蓄積作用及其評價 二、蓄積毒性試驗方法及其評價 9/15/2020 30 1．固定劑量法： 一般常選用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法進行染毒。先求出 LD50，然后選取相同條件的 40只 (或更多 )實驗動物，分為兩組，一為染毒組，一為對照組，每組至少20只，雌雄各半。試驗組在 1／ 20～ l／ 50LD50的范圍內(nèi)選定一個劑量，每日以固定劑量、定時和相同途徑進行染毒 ,試驗期間觀察記錄每組動物死亡數(shù)。當(dāng)試驗組累積發(fā)生一半動物死亡即可終止試驗。此時，計算累積總接觸劑量 [LD50(n)]，根據(jù)公式計算 K值，然后依表6— 5進行評價。但若接觸劑量已累積達到 5個 LD50劑量，也可終止試驗。 蓄積作用及其評價 二、蓄積毒性試驗方法及其評價 9/15/2020 31 2．劑量遞增法： 在試驗期間，當(dāng)化學(xué)毒物引起動物累積死亡一半時即可終止試驗，計算 K值進行評價。一般來說，在試驗第 2l天也可結(jié)束試驗，因為這之前如果動物沒有死亡或死亡數(shù)不足一半，說明其累積劑量已達 ，即 K＞ 5。使用本方法時要注意染毒期間定期 (每4天一次 )給動物稱重，按實測體重，調(diào)整化學(xué)毒物的染毒絕對量。 蓄積作用及其評價 二、蓄積毒性試驗方法及其評價 9/15/2020 32 ? 3． 劑量固定的 20天蓄積法： 它通常采用經(jīng)口灌胃染毒方式 ， 將動物隨機分為 5個組 ，包括陰性對照組和 1/20 LD50、 l/10 LD50、 1/5 LD50和 1/2 LD50四個劑量組 ， 每組動物數(shù) 10只 ， 雌雄各半 。 每日染毒一次 ，連續(xù)染毒 20天 。 觀察每組雌雄合計的死亡動物數(shù)量 。 試驗結(jié)束時根據(jù)下列標(biāo)準(zhǔn)進行評定： ① 各劑量組均無死亡 ， 即為蓄積性不明顯； ② 如僅 1/2LD50劑量組有死亡 ， 其他組均無死亡 ，則為弱蓄積性； ③ 如 1/20LD50劑量組無死亡 ， 其他各組間死亡數(shù)有劑量反應(yīng)關(guān)系時 ， 則為中等蓄積性； ④ 如 1/20LD50劑量組有死亡 ， 且有劑量反應(yīng)關(guān)系 ， 則為強蓄積性 。 蓄積作用及其評價 二、蓄積毒性試驗方法及其評價 9/15/2020 33 (二 )生物半減期法： 生物半減期 (biological halflife， t1/2)法是用毒物動力學(xué)原理描述化學(xué)毒物在機體內(nèi)的蓄積作用 。 化學(xué)毒物在體內(nèi)蓄積的速度和量與機體單位時間內(nèi)吸收該物質(zhì)的速度以及清除速度有關(guān) 。 即使化學(xué)毒物以相等的時間間距恒速地吸收入血液 ， 該物質(zhì)在一定劑量范圍內(nèi)在機體的蓄積量也不呈直線無限地增加 ， 而是呈曲線形上升并有一定的極限 。 這是因為化學(xué)物質(zhì)吸收進入機體的同時體內(nèi)也發(fā)生著代謝轉(zhuǎn)化及清除的過程 (包括血中化學(xué)毒物向組織臟器的分配過程 )。 當(dāng)化學(xué)毒物的吸收過程與代謝轉(zhuǎn)化 —清除的過程達到平衡時 ， 其蓄積量基本上不再增加 。 一般來說 ， t1/2d較短的化學(xué)毒物達到蓄積極限所需的時間也短 ，t1/2長者達到蓄積極限的時間也長 。 蓄積作用及其評價 二、蓄積毒性試驗方法及其評價 9/15/2020 34 一 亞慢性毒性作用： ? 亞慢性毒性的概念