【正文】 染色體畸變?cè)囼?yàn)或顯性致死試驗(yàn)為必做項(xiàng)目，若有一項(xiàng)出現(xiàn)陽(yáng)性，還需從精子畸形試驗(yàn)、體外培養(yǎng)細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)、 UDS、果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)等試驗(yàn)中再選擇兩項(xiàng)進(jìn)行。使用哺乳動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行體外試驗(yàn)，常選 LD50或 LD80為最大劑量。例如，Ames試驗(yàn)中陽(yáng)性對(duì)照未出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，應(yīng)考慮突變菌株可能發(fā)生問(wèn)題，另一種可能是代謝活化能力不足。 ? ②通常的實(shí)驗(yàn)材料有病毒、細(xì)菌、真菌、培養(yǎng)的哺乳細(xì)胞、植物、昆蟲(chóng)及哺乳動(dòng)物等。 發(fā)生于生殖細(xì)胞的整倍體改變 ， 幾乎都是致死性的 。 亞慢性和慢性毒性試驗(yàn) 一、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)的概念、目的 9/15/2020 37 二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì) （一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇 亞慢性和慢性毒性試驗(yàn) 亞慢性毒性試驗(yàn) 年齡： 大鼠 80~100g 狗 8~12月 小鼠 10~15g 數(shù)量： 小動(dòng)物 ≥20 大動(dòng)物 ≥6 性別： 雌雄各半 慢性毒性試驗(yàn) 年齡： 大鼠 50~70g 狗 8月 小鼠 初斷乳 數(shù)量： 小動(dòng)物 ≥40 大動(dòng)物 ≥8 性別： 雌雄各半 9/15/2020 38 （二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒期限： ? 工業(yè)毒理學(xué) —— 3－ 6個(gè)月 ? 食品毒理學(xué) —— 6個(gè)月－ 1年 ? 環(huán)境毒理學(xué) —— 6個(gè)月－ 1年 ? 致癌試驗(yàn) —— 接近或等于動(dòng)物的預(yù)期壽命 亞慢性和慢性毒性試驗(yàn) 二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì) 9/15/2020 39 二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì) （二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒期限 亞慢性和慢性毒性試驗(yàn) 9/15/2020 40 ? 經(jīng)消化道 ? 經(jīng)呼吸道 ? 經(jīng)皮膚 亞慢性和慢性毒性試驗(yàn) 二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì) （三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒方式 9/15/2020 41 ? 亞慢性毒性的劑量選擇 ? 陰性對(duì)照組 ? 低劑量組 ? 中劑量組 ? 高劑量組 急性毒性的閾劑量 1/20~1/5 LD50 ? 組距： 3~10倍，最低不小于 2倍 ? 慢性毒性的劑量選擇 ? 陰性對(duì)照組 ? 低劑量組 ? 中劑量組 ? 高劑量組 亞慢性閾劑量或其 1/5~1/2 1/10 LD50 ? 組距： 2~5倍，最低不小于2倍 二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì) （四）試驗(yàn)分組和劑量設(shè)計(jì) 亞慢性和慢性毒性試驗(yàn) 9/15/2020 42 （五）觀察指標(biāo) 亞慢性和慢性毒性試驗(yàn) 二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì) 9/15/2020 43 ： ?外觀體征、行為活動(dòng)、體重、食物利用率 2. 一般化驗(yàn)指標(biāo)： 3. 系統(tǒng)尸解和病理學(xué)檢查： ?（ 1） 臟器濕重、臟器系數(shù)（ 臟 /體比值 ） （ 如肝 /體比，即 (全肝濕重 /體重 )?100 ） ?（ 2） 病理學(xué)檢查 ： 亞慢性和慢性毒性試驗(yàn) 二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì) （五）觀察指標(biāo) 9/15/2020 44 亞慢性和慢性毒性試驗(yàn) 二、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì) 9/15/2020 45 四、局部毒作用 ? ? ? ? ? ? ? （體外）試驗(yàn) 局部作用 9/15/2020 46 第七章 外源化學(xué)物質(zhì)突變作用 衛(wèi)生毒理學(xué)教研室 9/15/2020 47 遺傳毒理學(xué) ?第一節(jié) 基本概念 ?第二節(jié) 化學(xué)毒物致突變的類(lèi)型 ?第三節(jié) 致突變作用機(jī)制和后果 ?第四節(jié) 機(jī)體對(duì)致突變作用的影響 ?第五節(jié) 觀察化學(xué)毒物致突變作用 的基本方法 9/15/2020 48 基本概念 ? 遺傳毒理學(xué) (Geic Toxicology) ? 是毒理學(xué)的一個(gè)分支，研究外源化學(xué)物及其他環(huán)境因素對(duì)生物體遺傳機(jī)構(gòu)的損害作用及其規(guī)律。 每日染毒一次 ，連續(xù)染毒 20天 。 急性毒性作用 9/15/2020 22 二、急性毒性試驗(yàn) ? (六 )經(jīng)典急性毒性試驗(yàn)的局限性 ? ? ? LD50僅僅是一個(gè)近似值 ? 癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學(xué)、血液學(xué)及其它化驗(yàn)檢查所提供的深入細(xì)致的毒性信息。 可根據(jù)以下公式計(jì)算出劑量分組： i=(lgLD90lgLD10)／ (n1) 或： i=(lgLD100lgLD0)／ (n1) 式中 i為組距 (相鄰的兩個(gè)劑量組對(duì)數(shù)劑量之差 )； n為設(shè)計(jì)的劑量組數(shù) 。例如：大鼠 180～ 240g、小鼠 18～ 25g、家兔 2～ 、豚鼠 200～ 250g、狗 10～ 15kg。 2 蓄積毒性 ? 167。 ?② 動(dòng)物易于獲得 ?③ 品系純化 ?④ 價(jià)格較低和易于飼養(yǎng)等條件 。 LD50的計(jì)算方法常用寇氏法 、 概率單位法 、 霍思法等 。 急性毒性作用 9/15/2020 20 二、急性毒性試驗(yàn) ? （五）試驗(yàn)周期與毒效應(yīng)觀察 : ? : ?急性毒性試驗(yàn)中，對(duì)死亡的動(dòng)物均應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大體解剖和病理組織學(xué)檢查，肉眼觀察主要臟器的大體病理變化，如臟器大小、外觀、色澤的變化，有無(wú)充血、出血、水腫或其它改變，對(duì)有改變的臟器進(jìn)行取材做組織病理學(xué)檢查。但若接觸劑量已累積達(dá)到 5個(gè) LD50劑量，也可終止試驗(yàn)。 慢性毒性 (chronic toxicity)是指人或?qū)嶒?yàn) 動(dòng)物長(zhǎng)期 (甚至終生 )反復(fù)接觸低劑量的化 學(xué)毒物所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。 染色體數(shù)目的改變會(huì)導(dǎo)致基因平衡的失調(diào) ，可能影響細(xì)胞的生存或造成形態(tài)及功能上的異常 。體內(nèi)試驗(yàn)具有完整的活化系統(tǒng)，而體外試驗(yàn)則通過(guò)加入模擬代謝系統(tǒng)，如 S9來(lái)彌補(bǔ)缺乏活化系統(tǒng)的不足。陰性對(duì)照除了無(wú)處理因素外，與實(shí)驗(yàn)組完全相同。 ? ③傳統(tǒng)的長(zhǎng)期致癌試驗(yàn)，花費(fèi)大，周期長(zhǎng)，不能適應(yīng)化學(xué)物質(zhì)快速增長(zhǎng)的需要。 ? 在對(duì)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)組合得到的致突變作用結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步研究時(shí)，其他試驗(yàn)如DNA加合物測(cè)定、 DNA鏈斷裂檢測(cè)、 DNA修復(fù)和重組試驗(yàn)等都可作為供選擇的試驗(yàn)。 觀察化學(xué)毒物致突變作用的基本方法 9/15/2020 85 致突變?cè)囼?yàn)舉例 ? 美國(guó) EPA毒物處 (1936)提出了一個(gè)三階段的試驗(yàn)方案，把遺傳毒性檢測(cè)和生殖細(xì)胞致突變性驗(yàn)證分階段進(jìn)行。 ? 3．純化酶和基因工程 應(yīng)用純化細(xì)胞色素 P450、谷胱苷肽轉(zhuǎn)移酶及過(guò)氧化物水解酶，可嚴(yán)格控制代謝產(chǎn)物誘發(fā)突變的條件，但技術(shù)難度大。 微核試驗(yàn) (Micronucleus test， MNT)是觀察受試物能否產(chǎn)生微核的試驗(yàn)。 ? 其中③實(shí)際上指基因突變，④指染色體畸變。 ?化學(xué)誘變劑 (chemical mutagen) ?基因突變 (gene mutation) 一個(gè)或幾個(gè) DNA堿基對(duì)的改變 ?染色體畸變 (chromosome aberration) 染色體的結(jié)構(gòu)及數(shù)目改變 基本概念 9/15/2020 51 ? DNA與基因 : 基因 (gene) 基因組 (genosome) ? 染色質(zhì) (chromatin)與染色體 (chromosome) ? 體細(xì)胞 (somatic cell)和生殖細(xì)胞 (germ cell) ? 基因型 (genotype)與表型 (pheotype) ? 細(xì)胞周期 (cell cycle)、有絲分裂 (mitosis)與減數(shù)分裂 (meiosis) 基本概念 9/15/2020 52 基本概念 9/15/2020 53 基本概念 9/15/2020 5