120301 醫(yī)學分子生物學-1-文庫吧
2025-02-26 15:01 本頁面
【正文】 ? 破壞免疫功能 ? 患兒很少活到成年 ? 第一例基因臨床治療的方案 (,NIH) 基因治療 轉(zhuǎn)基因技術(shù) 克隆與“動物藥廠” ? 核酸水平（ DNA, RNA) 核酸的分離純化 。 PCR技術(shù) ；分子雜交 ；分子克隆 ； RNA干擾；基因芯片； DNA測序等 ； ? 蛋白水平 蛋白分離純化； Western Blot。 蛋白芯片等 ； ? 蛋白質(zhì)與核酸相互作用 凝膠滯后實驗；染色體免疫沉淀； DNAaseI足紋分析；Southwestern雜交； ? 蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用 酵母雙雜交；蛋白質(zhì)免疫共沉淀； 分子生物學常用技術(shù) The Nobel Prize in Physiology or Medicine： ? 1978年 Arber等 限制性核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn) ? 2023年 Fire， Mello RNA干擾 ? 2023年 Smith等 基因打靶 The Nobel Prize in Chemistry ： ? 1958年 Sanger 胰島素序列測定 ? 1980年 Sanger等 雙脫氧鏈終止法測序 ? 1993年 Mullis 聚合酶鏈反應（ PCR） M. Smith 寡聚核苷酸定點誘變技術(shù) 課程主要內(nèi)容 ? 第一章 生物大分子的分離純化 ? 第二章 分子生物學常用技術(shù)（ PCR、核酸 分子雜交、基因測序、生物芯片等） ? 第三章 基因工程 ? 第四章 基因敲除與 RNA干擾 ? 第五章 細胞培養(yǎng)技術(shù) ? 核酸和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能及相互作用是分子水平生命活動的 基礎(chǔ) ； ? 內(nèi)源基因的突變、表達及調(diào)控的異常和外源致病基因的侵入是人類疾病發(fā)生、發(fā)展的根本原因。 生物大分子 是指生物體內(nèi)由分子量較低的基本結(jié)構(gòu)單位首尾相連形成的多聚化合物。 第一章 生物大分子的分離純化 ? 核酸（ DNA， RNA）和蛋白質(zhì) 是生物體中最重要的生物大分子，是分子生物學研究和分子診斷的對象。 ? 核酸 和蛋白質(zhì) 的分離純化是分子生物學 研究及對疾病進行分子診斷的最基礎(chǔ)工作。 核酸的化學組成 核 酸 （ RNA、 DNA） 核苷 酸 磷酸 核苷 戊糖 堿基 核糖（ RNA） 脫氧核糖（ DNA） A、 G、 C、 U A、 G、 C、 T 堿 基 腺嘌呤 鳥嘌呤 NNN HN123456789 嘌 呤 嘧 啶 尿嘧啶 胞嘧啶 胸腺嘧啶 NN H132456堿 基 胞嘧啶核苷 尿嘧啶核苷鳥嘌呤核苷腺嘌呤核苷NNO HH ONNN H2H ONNO HH2NNNNNNNN H2OHHO HHO HHH O C H2H O C H2OHHO HHO HHOHHO HHO HHH O C H2OHHO HHO HHH O C H2如果是存在于 DNA中的脫氧核苷則 2’位則是 H而不是 OH 核 苷 磷酸 + 戊糖 + 堿基 = 核苷酸 POOO HOHOCH2O HO HNNN H2OOHOCH2O HO HNNN H2OOPOONNNNN H 2OHHO HHO HHO C H 2OPOOOPOO三磷酸腺苷 ( A TP )NTP， NDP， NMP dNTP， dNDP， dNMP 磷酸二酯鍵 DNA和 RNA的一級結(jié)構(gòu) RNA序列 5’ pAAUUCGAUCGAAGGCGCCGGUU3’ DNA序列 5’ pAATTCGATCGAAGGCGCCGGTT3’ 3’ TTAAGCTAGCTTCCGCGGCCAAp5’ 核苷酸鏈（一級結(jié)構(gòu)） 339。， 539。–磷 酸二酯鍵 3?末端 (游離羥基 ) 5?末端 (游離磷酸基 ) DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu) ?特征： ①兩條鏈以 反向平行 的方式圍繞同一中心軸向右盤繞 ②主鏈處于螺旋的外側(cè)（核糖 +磷酸） 親水核糖平面與螺旋軸平行 堿基處于螺旋的內(nèi)側(cè)，與中軸垂直 ③螺距： 10bp— — 3600 ?=2nm ④ 大溝與小溝 ： 蛋白質(zhì)識別 DNA的特定遺傳信息的關(guān)鍵點 ⑤ 堿基互補配對 A = T,C≡G 核酸變性 ? 在某些理化因素的作用下，核酸雙鏈分子堿基對的氫鍵斷裂，疏水作用被破壞，雙鏈螺旋或發(fā)夾結(jié)構(gòu)被拆開，有規(guī)則的空間結(jié)構(gòu)被破壞，形成單鏈分子，稱為核酸的變性。 變性 復性 核酸的變性、復性 堿基配對 A＝ T， C≡G 一級結(jié)構(gòu)不變； 氫鍵； 堿基堆積力； 核酸的變性與復性 變性， 解鏈溫度 或 融解溫度（ melting temperature， Tm） 復性， 淬火 （ quench）與 退火（ annealing） 50％的 DNA變性 ? 第一節(jié) 核酸分離純化的設(shè)計及原則 ? 第二節(jié) 真核細胞基因組 DNA的分離純化 ? 第三節(jié) 質(zhì)粒 DNA的提取與純化 ? 第四節(jié) 真核細胞 RNA的分離純化 一、核酸的分離純化 DNA RNA 核酸的一般理化性質(zhì) ? 多元酸，具較強的酸
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