第六節(jié)植物克隆載體-文庫(kù)吧
2025-09-15 15:39 本頁(yè)面
【正文】 Ti 細(xì)菌植物間DNA 的轉(zhuǎn)移根癌農(nóng)桿菌中 Ti質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移 L I HK a nrS p e/ S t rr L I H O CStmstmr共整合作用共培養(yǎng)T i 質(zhì)粒p M O N 載體植物細(xì)胞內(nèi)L I HL I HTi載體的共整合作用 LIHtmsTiVirLIHT i 1T i 3LIHT i 2LIHT i 5T i 6T i 4v i r分離兩個(gè)25 bp重復(fù)序列,插入細(xì)菌載體分離25 bp和LIH序列,插入細(xì)菌載體除去致瘤基因除去致瘤基因和25bp序列Vir 用細(xì)菌載體DNA取代TDNA除去全部TDNAT i 5 是中間載體, T i 6 是雙質(zhì)粒載體Ti基 因片段植物標(biāo)記基因Ti質(zhì)粒衍生的植物克隆載體 K a nr AprAprpBR322MCS N O Spro mote r O C St e r m i n a t o rAprK a nr N O Spro mote r O C StermonatorM C S非致瘤載體的重組 ii)非致瘤 Ti質(zhì)粒載體 (disarmed Ti plasmid) 該類載體實(shí)際上是輔助載體，其特點(diǎn)是用 pBR322 DNA取代了 Ti質(zhì)粒中參與植物激素合成基因序列，它可以與含有 pBR322 序列的 DNA發(fā)生同源重組，構(gòu)成一個(gè)完整的重組 DNA序列，然后轉(zhuǎn)移至植物細(xì)胞。 如果在中間載體中插入一個(gè) TDNA的 25bp重復(fù)序列，在非致瘤 Ti質(zhì)粒載體中插入另一個(gè) 25bp重復(fù)序列，經(jīng)重組后形成一個(gè)完整的 TDNA，這種系統(tǒng)稱之為 分離末端載體系統(tǒng) (SEV,Split End Vector)。 iii)雙末端載體 (binary vector) 該類載體的顯著特點(diǎn)是含有兩個(gè) TDNA末端，所有需要轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中去的序列都位于其間。 共整合作用共培養(yǎng)共整合體中間載體pT i B 6 S3 SE分離末端載體的共整合作用 (SEV) 例子 : pBIN19的結(jié)構(gòu) TDNA的轉(zhuǎn)移必須依賴于輔助質(zhì)粒， pAL4404就是一個(gè) TDNA全部丟失的天然缺失突變體。轉(zhuǎn)移過程： pBIN19 TDNA進(jìn)入植物細(xì)胞 該系統(tǒng)的最終轉(zhuǎn)化頻率比 SEV系統(tǒng)高得多 3） 標(biāo)記基因 生化標(biāo)記基因 ：冠癭堿合成酶基因（ NOS， OCS） lacZ, CAT, 熒光酶基因， GUS 藥物抗性標(biāo)記基因 ：除草劑耐受性基因， CHMTⅡ （金屬巰蛋白基因）， Bleomycin， Hgyr， SPT, DHFR, NPTⅡ (Kanr, G418r) 標(biāo)記基因常用的啟動(dòng)子有 CaMV 35S,OCS,NOS等。 轉(zhuǎn)化 接合 轉(zhuǎn)移 TRTLKanr La cZαp B I N 19 (1 0 kb)MCS植物的雙元載體 pBIN19 二、病毒載體 1. DNA病毒載體 1） CaMV ： 8kb，環(huán)狀 ds
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