【正文】 采用液相色譜法 (GB/T163451996) ? 樣品處理?xiàng)l件同糖精鈉。 ? 該方法可同時(shí)測(cè)定糖精鈉、咖啡因、阿斯巴甜。 防腐劑（山梨酸、苯甲酸）的測(cè)定 ： ? 定義：防腐劑是指能防止食品腐敗、變質(zhì)，抑制食品中微生物繁殖，延長(zhǎng)食品保存期的物質(zhì)，它是人類使用最悠久、最廣泛的食品添加劑。隨著食品保藏新工藝、新設(shè)備的完善，防腐劑將逐步減少使用，甚至不用。目前，我國(guó)允許使用的品種主要有苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、對(duì)羥基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸鈉、丙酸鈣、脫氫乙酸等。 ? 性質(zhì)： （ 1） 苯甲酸 ， 為白色有絲光的鱗片或針狀結(jié)晶 ， 微溶于水 ， 易溶于氯仿 、 丙酮 、 乙醇 、 乙醚等有機(jī)溶劑 ， 化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定 。 苯甲酸鈉易溶于水 ， 難溶于有機(jī)溶劑 ， 與酸作用生成苯甲酸 。 （ 2） 山梨酸為無(wú)色 、 無(wú)臭的針狀結(jié)晶 ， 山梨酸難溶于水 ，易溶于乙醇 、 乙醚 、 氯仿等有機(jī)溶劑 。 山梨酸鉀易溶于水 ， 難溶于有機(jī)溶劑 ， 與酸作用生成山梨酸 。 （ 3） 苯甲酸與山梨酸兩種防腐劑主要用于酸性食品的防腐 。 山梨酸是一種不飽和的脂肪酸 ， 在機(jī)體內(nèi)可參加正常的新陳代謝 ， 最后被氧化為二氧化碳和水 ， 因此 ， 山梨酸是一種比苯甲酸更安全的防腐劑 。 酸堿滴定法測(cè)定苯甲酸及苯甲酸鈉 ? 原理： 試樣中加入飽和氯化鈉溶液，在堿性條件下進(jìn)行萃取，分離出蛋白質(zhì)、脂肪等，然后酸化，用乙醚提取試樣中的苯甲酸，再將乙醚蒸去，溶于中性醚醇混合液中，最后以標(biāo)準(zhǔn)堿液滴定。 ? 儀器和試劑： 中性醚醇混合液 ?操作步驟 ： (1)樣品處理 : 固體樣品： 稱 100g樣于 500ml容量瓶中 → 加 200ml水 → 加AR NaCl直到不溶解為止（降低苯甲酸在水中溶解度，以減少在提取及水洗過(guò)程中的損失） → 用 10%NaOH調(diào)為堿性（這時(shí)苯甲酸生成苯甲酸鈉，并以苯甲酸鈉狀態(tài)存在） → 用飽和 NaCl定容 500ml→ 靜臵 2小時(shí) → 過(guò)濾 → 棄去初液 → 收集濾液 含酒精的樣品： 吸取 250mL樣品用 10%NaOH調(diào)為堿性→ 水浴蒸發(fā)至 100mL→ 用飽和 NaCl定容 250ml → 過(guò)濾 →棄去初液 → 收集濾液 含脂肪多的樣品： 乙醚除脂肪 (2)提取及滴定： 吸濾液 100ml→ 于 500ml分液漏斗 → 加 1︰ 1 HCl 5ml酸化 → 用 150ml乙醚分三次提取 → 每次振蕩不能太激烈以防乳化 → 合并醚層 → 連接蒸餾裝臵 → 回收乙醚（ 50℃ 水?。?→ 用 10ml中性醚醇 +10ml水溶解殘?jiān)?加 2滴酚酞 → 用 （同時(shí)要求做空白實(shí)驗(yàn)） (3)結(jié)果計(jì)算： 樣品中苯甲酸鈉的含量 1 0 02 5 4 410 31 ?????? ?mVcX? 說(shuō)明： （ 1）預(yù)處理時(shí)用 NaCl飽和，作用是除去蛋白質(zhì)及其水解產(chǎn)物，及降低苯甲酸鈉的溶解度降低苯甲酸在水中溶解度，以減少在提取及水洗過(guò)程中的損失 （ 2）采用此方法測(cè)苯甲酸及其鹽類最大缺點(diǎn)是：樣品中有其它有機(jī)酸時(shí)，乙醚萃取時(shí)易帶過(guò)來(lái)，所以此法測(cè)定誤差較大。 （ 3）適用于樣品中苯甲酸含量為 %以上的分析。 、苯甲酸 ? 測(cè)定原理 （ 1）氣相色譜原理： 氣相色譜法是采用惰性氣體為流動(dòng)相（稱為載氣）的一種色譜法。即載氣載著 “ 氣化 ” 的試樣，通過(guò)色譜柱中的固定相，使試樣中各組分分離，并先后從柱中流出。其檢測(cè)流程： 被測(cè)樣品被氣化后，在流速保持一定的惰性氣體的帶動(dòng)下，進(jìn)入填有固定相的色譜柱。在色譜柱中樣品被分離成一個(gè)個(gè)單一組分，并以一定的次序從色譜柱中流出，進(jìn)入檢測(cè)器，轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，再經(jīng)放大后由記錄儀記錄下來(lái)并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。 定性： 根據(jù)保留時(shí)間定性 定量： 通常使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。取純物質(zhì)配成標(biāo)準(zhǔn)系列，分別取一定體積注入色譜儀，得到色譜峰，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制的關(guān)系曲線，即標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后在相同的條件下注入樣品處理液，根據(jù)色譜圖的峰面積在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得待測(cè)組分的濃度。 ? 山梨酸、苯甲酸的氣相色譜測(cè)定原理： 樣品經(jīng)酸化后，用乙醚提取山梨酸和苯甲酸，再用帶氫火焰離子化檢測(cè)器的氣相色譜儀進(jìn)行分離測(cè)定，然后與標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行比較定量。 ? 儀器和試劑 ： （ 1）乙醚、石油醚：沸程 30～ 60 ℃ （ 2） 山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：用石油醚 乙醚（ 3： 1）混合溶劑配制溶液每毫升相當(dāng) 2mg山梨酸或苯甲酸。 （ 3）山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取適量山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，以石油醚 乙醚（ 3： 1）混合溶劑稀釋至每毫升相當(dāng)于 50、 100、 150、 200、 250181。g山梨酸或苯甲酸。 （ 4）儀器：氣相色譜儀，帶氫火焰離子化檢測(cè)器 ? 操作步驟 (1)樣品的處理： 稱取 ，臵于 25mL帶塞試管中，加 6mol／ L HCI酸化，用 110mL乙醚提取 2 次，每次振搖 1min， 將上層醚提取液吸入另一個(gè) 25mL一帶塞試管中，合并乙醚提取液。用 3mL 4％ 氯化鈉酸性溶液洗滌 2次，靜臵 15min， 用滴管將乙醚層通過(guò)無(wú)水硫酸鈉濾入 25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混勻。準(zhǔn)確吸取 5mL乙醚提取液于 5mL 帶塞刻度試管中，臵 40℃ 水浴上揮干，加入 2mL石油醚 乙醚（ 3： 1）混合溶液溶解殘?jiān)?，備用? 思考： 用 GC法測(cè)定山梨酸和苯甲酸的含量時(shí)為什么要經(jīng) 過(guò)酸化處理？ (2)色譜參考條件 色譜柱：玻璃柱，內(nèi)徑 3mm， 長(zhǎng) 2m， 氣流速度：載氣、氮?dú)猓?50mL／ min（ 氮?dú)夂涂諝狻? 氫氣比按各儀器型號(hào)不同選擇各自的最 佳比例條件）。 溫度：進(jìn)樣口 230 ℃ ， 檢測(cè)器 230 ℃ ， 柱溫 170 ℃ 。 （ 3）測(cè)定： 進(jìn)樣 2181。L標(biāo)準(zhǔn)系列中各濃度標(biāo)準(zhǔn)使用液于氣相色譜儀中，可得不同濃度山梨酸、苯甲酸的峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)進(jìn)樣 2181。L樣品溶液，測(cè)得峰面積可從標(biāo)準(zhǔn)曲線相應(yīng)的山梨酸、苯甲酸的濃度。 山梨酸和苯甲酸的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖如圖所示 ? 結(jié)果計(jì)算 式中： X——樣品中山梨酸或苯甲酸的含量， g／ kg； ρ ——標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得山梨酸或苯甲酸的量， μg/mL； V1——加入石油醚 乙醚 (3+1)混合溶劑的體積， mL： m——樣品的質(zhì)量， g； 5——測(cè)定時(shí)吸取乙醚提取液的體積， mL； 25——樣品乙醚提取液的總體積， mL。 ）或 LgKggmVX //(1 0 0 02551?????? 說(shuō)明及注意事項(xiàng)： 由測(cè)得苯甲酸的量乘以相對(duì)分子質(zhì)量比 ，即為樣品中苯甲酸鈉含量。 由測(cè)得山梨酸的量乘以相對(duì)分子質(zhì)量比 ，即為樣品中山梨鉀的含量。 通過(guò)無(wú)水硫酸鈉層過(guò)濾后的乙醚提取液應(yīng)達(dá)到去除水分的目的，否則 5mL乙醚提取液在 40 ℃ 揮去乙醚后仍殘留少量水分會(huì)影響 l測(cè)定結(jié)果，這時(shí)必須將殘留水分揮干，但會(huì)析出極少量白色氯化鈉 ， 當(dāng)出現(xiàn)此情況時(shí)應(yīng)攪松殘留的無(wú)機(jī)鹽后加入石油醚 乙醚（ 3： 1）振搖，取上清液進(jìn)樣，否則氯化鈉覆蓋了部分山梨酸、苯甲酸，使定結(jié)果偏低。 、苯甲酸 可同時(shí)用于苯甲酸及山梨酸的測(cè)定。 ? 原理 樣品加溫除去二氧化碳和乙醇，調(diào) pH至近中性，過(guò)濾后進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，根據(jù)保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性和定量。 ? 儀器、試劑 、操作步驟同 HPLC法測(cè)定糖精鈉的含量 ? 根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。