第十六章細(xì)胞因子與細(xì)胞粘附因子的測(cè)定-文庫(kù)吧
2025-07-17 13:26 本頁(yè)面
【正文】 IL3 105 24 46 IL4CH12 510 3 48 6 IL5B13 510 4 36 12 IL5T88M 110 5 24 12 IL5BCL1 105 72 6 IL5CloneK,IN/2bx 105 24 46 IL7TS1 310 4 66 6 IL9T10 105 72 6 IL11UT7 10 5 72 6 SCF（干細(xì)胞因子）CCL64* 510 8 72 8 TGFβ, IF 510 4 24 48 GMCSFM14/ 510 4 24 48 MCSF/GCSF特點(diǎn)：不使用放射性核素， 以細(xì)胞代謝變化為增殖指征 指示細(xì)胞的增殖情況與線粒體代謝活性相關(guān) 測(cè)定步驟類(lèi)似與同位素?fù)饺敕ㄏ啾葥饺胛铮?MTT而非 3HTdR；反應(yīng)條件：選用的細(xì)胞及其濃度、 培養(yǎng)時(shí)間不同(2) MTT 比色法細(xì)胞株 /原代細(xì)胞 細(xì)胞終濃度（細(xì)胞數(shù) /ml） 加入 MTT前溫育時(shí)間（ h） 檢測(cè)細(xì)胞因子B9， MH60,BSF2,TTD1 510 4/210 5 96/48 IL6B911 510 4 96 IL11B913 510 4 96 IL13KYM1D4 210 3 72MV3D9 510 3 120 TGFβWEHI164/clone13 210 3 72 TNF32D/Mp110S 110 3 44L929 210 5 56 TNFCTLL2 105 2224 IL2小鼠基質(zhì)細(xì)胞 , 32DCL27 10 5 72 IL3細(xì)胞增殖或抑制活性檢測(cè)的 MTT比色法常用靶細(xì)胞 對(duì)指示細(xì)胞具有破壞作用的細(xì)胞因子，若與細(xì)胞共育將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此，待測(cè)細(xì)胞因子作一系列稀釋后加至指示細(xì)胞培養(yǎng)體系，以檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞的死細(xì)胞數(shù)作為判斷指標(biāo)，死細(xì)胞數(shù)量與細(xì)胞因子的活性呈正比。試驗(yàn)時(shí)，與細(xì)胞增殖或抑制方法一樣，以已知活性的細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照。死、活細(xì)胞情況可用同位素 51Cr釋放法判斷，或應(yīng)用臺(tái)盼蘭染色死細(xì)胞后直接計(jì)數(shù)。也可通過(guò)結(jié)晶紫、萘酚藍(lán)黑、 MTT、 NBB等著染活細(xì)胞，再用脫色液脫出染料后酶標(biāo)儀比色測(cè)定吸光值。死細(xì)胞數(shù)、 51Cr釋放量越高或比色測(cè)定的吸光值越低，表明待測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞毒活性則越高。應(yīng)用系列稀釋的細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品，制作其活性與劑量關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以此作為待測(cè)品活性的定量測(cè)定的基礎(chǔ)。本法常用于 TNF等的測(cè)定二、細(xì)胞毒活性測(cè)定法基本原理252。Wish 、 Hep2/c 人干擾素252。L929 小鼠干擾素252。Ratec 大鼠干擾素252。A549252。MDBK 多種族的 IFNα和 IFNγ本法常用于 IFN等的測(cè)定 ， IFN可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抑制病毒RNA和 DNA合成的酶，保護(hù)細(xì)胞不受病毒感染，產(chǎn)生細(xì)胞病變效應(yīng)（ CPE）。 VSV、 EMCV及 Sindbis virus等216。細(xì)胞病變效應(yīng) (C
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