《種子制備》ppt課件-文庫吧
2025-04-20 22:48 本頁面
【正文】 釋以后，在固體平板上進行分離，挑取部分 單菌落進行生產(chǎn)能力的測定，經(jīng)反復篩選， 以確定生產(chǎn)能力更高的菌株代替原來的菌株 第二章 種子制備 生化工藝 24 自然選育的一般步驟 表現(xiàn)形態(tài) 目的代謝產(chǎn)物產(chǎn)量 遺傳基因型純度 傳代穩(wěn)定性 第二章 種子制備 生化工藝 25 從自然界中分離篩選菌種的方法步驟 采 樣 增殖培養(yǎng) 純種分離 純 培 養(yǎng) 生產(chǎn)性能測定 方法、地點、時間和周圍環(huán)境記錄 純種分離的原則就是使培養(yǎng)物獲得單個菌落： 1．稀釋分離法 2．平板劃線分離法 ⑴ 涂菌： ⑵ 劃線分離： ①分步劃線法；②一次劃線法： 3．組織分離法 測定代謝產(chǎn)物或其它目的性狀 第二章 種子制備 生化工藝 26 指用人工的方法處理微生物 ， 使它們發(fā)生突變 ， 再從中篩選出符合要求的突變菌株 ， 供生產(chǎn)和科學實驗用 。 誘變育種與其他育種方法相比 ，具有操作簡便 、 速度快和收效大的優(yōu)點 ， 至今仍是一種重要的 、 廣泛應用的微生物育種方法 。 第二章 種子制備 生化工藝 27 誘變的基本原理 誘變劑 物理誘變劑 紫外線 、 X— 射線 、 γ — 射線 ， 快中子 化學誘變劑 亞硝酸 、 烷化劑 生物誘變劑 噬菌體 誘變機理 ①物理誘變劑 紫外線：形成胸腺嘧啶二聚體 ②化學誘變劑 堿基突變、染色體畸變 第二章 種子制備 生化工藝 28 ? 誘變育種步驟 ? 出發(fā)菌株的選擇 ? 處理菌懸液的制備 ? 誘變處理 ? 中間培養(yǎng) ? 分離和篩選 關鍵是制備單細胞和單孢子狀態(tài)的、活力類似的菌懸液 第二章 種子制備 生化工藝 29 確定出發(fā)菌株 ↓ 菌種的純化選優(yōu) ↓← 出發(fā)菌株的性能鑒定 同步培養(yǎng) ↓ 制備單細胞（或單孢子）懸液 ↓← 活菌濃度測定 誘變劑的選擇與確定誘變劑量的預試驗 ↓ 誘變處理 ↓ 平板分離 ↓ 計形態(tài)變異的菌落數(shù)，計算突變率 挑取疑似突變菌落純培養(yǎng) ↓ 突變體的初步篩選 ↓← 用簡單快捷的方法 重復篩選 ↓← 搖瓶發(fā)酵試驗 選出突變體（根據(jù)情況進行生產(chǎn)試驗或重復誘變處理） 第二章 種子制備 生化工藝 30 中間培養(yǎng) 處理方法： 讓變異處理后細胞在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)幾小時 ，以讓細胞的遺傳物質(zhì)復制 ， 讓細胞繁殖幾代 ， 以得到純的變異細胞 。 這樣 ， 隱性的變異就會顯現(xiàn)出來 ， 若不經(jīng)液體培養(yǎng)基的中間培養(yǎng) ， 直接在平皿上分離就會出現(xiàn)變異和不變異細胞同時存在于一個菌落內(nèi)的可能 ， 形成混雜菌落 ， 以致造成篩選結(jié)果的不穩(wěn)定和將來的菌株退化 。 第二章 種子制備 生化工藝 31 分離和篩選 篩選分初篩和復篩 。 初篩以迅速篩出大量的達到初步要求的分離菌落為目的 ，以量為主 。 復篩則是精選 ， 以質(zhì)為主 ， 也就是以精確度為主 。 因此在具體方法上就有差異 . 例如： 初篩可以在平皿上直接以菌落的代謝產(chǎn)物與某些染料或基質(zhì)的作用形成的變色圈或透明圈的大小來挑取參加復篩者 ， 而將 90%的菌落淘汰 。 在數(shù)量減少后就要仔細比較參加復篩和再復篩的菌株 ， 最后才能選得優(yōu)秀菌株 。 在以后的復篩階段 ， 還應不斷結(jié)合自然分離 ，純化菌株 。 第二章 種子制備 生化工藝 32 紫外線的誘變育種 紫外線誘變一般采用 15W紫外線殺菌燈 ， 波長為 2537A． 燈與處理物的距離為 15～ 30cm， 照射時間依菌種而異 ， 一般為幾秒至幾十分鐘 。一般我們常以細胞的死亡率表示 ， 希望照射的劑量死亡率控制在 70～80%為宜 。 被照射的菌懸液細胞數(shù)，細菌為 106個／ ml左右，霉菌孢子和酵母細胞為106～ 107個／ ml。由于紫外線穿透力不強，要求照射液不要太深，約～ ，同時要用電磁攪拌器或手工進行攪拌，使照射均勻。 由于紫外線照射后有光復活效應，所以照射時和照射后的處理應在
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