【正文】 機(jī)械法 review 機(jī)械法分裂實(shí)體組織包括：用 剪刀剪碎或用鋒利的解剖刀剁碎， 用勻漿器勻漿，用細(xì)注射針頭抽吸 細(xì)胞或細(xì)胞器懸液以分散細(xì)胞 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 review 采用網(wǎng)搓法同樣也能獲得大量 的細(xì)胞，機(jī)械法易造成細(xì)胞懸液中 細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán)塊，所以機(jī)械法 常與其他方法配合使用 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 剪碎法 網(wǎng)搓法 研磨法 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 剪碎法 protocol 1 將組織塊放入平皿中，加入少量的鹽水用剪刀將組織剪至勻漿，加入 100ml NS 2 用吸管吸取組織勻漿，先以100目尼龍網(wǎng)過濾到試管中 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 剪碎法 protocol 3 離心沉淀 1000rpm35min，再用 NS洗三次，每次以短時(shí)低速離心沉淀 (500800rpm)去除細(xì)胞碎片 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 剪碎法 protocol 4 以 300目尼龍網(wǎng)過濾除去細(xì)胞團(tuán)塊 5 70%冰乙醇固定，放入 04℃冰箱 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 剪碎法 網(wǎng)搓法 研磨法 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 網(wǎng)搓法 protocol 1 將 100目， 300目尼龍網(wǎng)扎 在小燒杯上 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 網(wǎng)搓法 protocol 2 把剪碎的組織放在網(wǎng)上，以眼科鑷子輕輕搓組織塊，邊搓邊用 NS沖洗，直到將組織搓完 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 網(wǎng)搓法 protocol 3 收集細(xì)胞懸液，離心沉淀500800rpm， 2min 4 70%乙醇固定，置 04℃ 冰箱備用 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 網(wǎng)搓法 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 剪碎法 網(wǎng)搓法 研磨法 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 研磨法 protocol 1 將組織剪至小塊 2 放入組織研磨器中，加入 12ml NS 3 轉(zhuǎn)動研棒，研至勻漿即可 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 研磨法 protocol 4 加入 NS 1020ml， 沖洗研器 5 收集細(xì)胞懸液，并經(jīng) 300目尼 龍網(wǎng)過濾，離心沉淀 500800rpm， 12min， 再用 NS洗三次，離心沉淀 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 機(jī)械法 研磨法 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 Method: 酶消化法 機(jī)械法 化學(xué)試劑處理法 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 化學(xué)試劑處理法 principle 化學(xué)試劑處理法的主要原理是將 細(xì)胞間起粘連作用的鈣鎂離子置換出 來，從而使細(xì)胞分散下來。 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 化學(xué)試劑處理法 principle reagent %EDTA ， 加入 Hank180。s液 100ml， 封裝高壓 消毒，置 04℃ 保存 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 化學(xué)試劑處理法 principle reagent 胰酶加 EDTA 胰酶 +PBS () 200ml， +PBS ()200ml， 用 時(shí)過濾 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 化學(xué)試劑處理法 protocol 1 將組織切成薄片放入試管 2 加入 EDTA液 5ml， 室溫， ， 棄之 3 加入胰酶 +EDTA液 510ml， 再37℃ 恒溫水浴 30min， 間斷振蕩 35次 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 化學(xué)試劑處理法 protocol 4 用 300目尼龍網(wǎng)過濾，離心沉淀1000rpm， 5min， 再以生理鹽水洗 23次，離心 500800rpm，12min 5 70%乙醇固定置冰箱中被檢 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 化學(xué)試劑處理法 summary 1 機(jī)械法常常造成嚴(yán)重的細(xì)胞 損傷，較低的細(xì)胞產(chǎn)量，為使細(xì)胞碎片不影響 FCM檢測結(jié)果，需采用適當(dāng)?shù)姆椒ǔニ槠虮M量減少碎片 實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 新鮮實(shí)體組織 化學(xué)試劑處理法 summary 2 酶學(xué)法、化學(xué)法對實(shí)體腫瘤的分散解