【正文】 E P I C S A L T R AE P I C S A L T R A 流式細胞分析分選儀流式細胞分析分選儀 FCM的樣品制備 Introduction Content: 1 單分散細胞懸液制備技術(shù) 2 細胞生物學(xué)特征標記技術(shù) 3 熒光染色技術(shù) Source: 1 實體組織 2 血液 3 脫落細胞 4 單層培養(yǎng)細胞 Introduction 實體組織單分散細胞的制備 Categorization: 1 新鮮實體組織 2 石蠟包埋組織 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 Definition: 新鮮實體組織是手術(shù)或活檢后根據(jù) 檢測目的而采用樣品，此樣品應(yīng)及時進 行適當(dāng)?shù)谋４嫣幚?，如及時用固定劑或 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 Definition: 低溫對組織進行保存，以避免由于室 溫過高、放置間過長而造成組織自溶，影 響檢測結(jié)果 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 Method: 酶消化法 機械法 化學(xué)試劑處理法 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 酶消化法 protocol 1 將適合于酶消化的組織置于離 心管中 2 將選好的酶溶液 12ml加入盛有 消化組織的試管中 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 酶消化法 protocol 3 一般消化 2030min(恒溫 37186。C 或室溫 )，消化期間要間斷振 蕩或吹打 4 終止消化，收集細胞懸液，以 尼龍網(wǎng) (200目 )過濾，除去大團 塊，以低速離心除去細胞碎片 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 酶消化法 protocol 5 將制備好的單細胞進行流式 細胞術(shù)分析或保存 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 酶消化法 principle 1 可以破壞組織間的膠原 2 可以水解組織細胞的緊密 連結(jié)裝置的蛋白性物質(zhì) 3 可以水解組織間的粘多糖物質(zhì) 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 酶消化法 enzyme 1 蛋白酶類 如胃蛋白酶，木 瓜蛋白酶，鏈蛋白酶和 中性 蛋白酶等 )都能夠所有組織中 的細胞 2 胰酶 能水解脂鍵和肽鍵 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 酶消化法 enzyme 3 膠原酶 能降解幾種分子類型 的膠原 4 溶菌酶 能水解糖蛋白和肽的 糖苷鍵 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 酶消化法 enzyme 5 彈性蛋白酶 能消化連接組織 的糖蛋白和彈性蛋白的纖維， 可用于解離血管、心臟和肝臟 的細胞 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 酶消化法 announcements 1 酶需要溶解于適當(dāng)?shù)娜芤? 中，而這種溶液不致于造 成酶效價降低 2 注意組織在消化液中的消 化時間 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 酶消化法 announcements 3 注意酶活性的 PH值 如胃 蛋白酶在堿性環(huán)境中失去活 性，胰酶在中性溶劑中活性 不佳 4 注意酶的適用濃度 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 酶消化法 announcements 5 隨時注意影響酶活性的其他 因素 6 免疫標記實驗時，酶處理可 能改變細胞膜的成分，從而 影響細胞亞群的區(qū)分 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織 Method: 酶消化法 機械法 化學(xué)試劑處理法 實體組織單分散細胞的制備 新鮮實體組織