【正文】 醫(yī)院檢驗(yàn)科 評(píng)估人： 審 核：瑞昌市人民醫(yī)院生物安全管理委員會(huì) 審核人： 2016年4月28日檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件第二章 人類免疫缺陷病毒HIV的生物危害評(píng)估報(bào)告人類免疫缺陷病毒（HIV）病毒特異性地侵犯CD4+T淋巴細(xì)胞，造成機(jī)體細(xì)胞免疫受損。臨床上初始表現(xiàn)為無癥狀病毒感染者，繼續(xù)發(fā)展為持續(xù)性全身淋巴結(jié)腫大綜合征和艾滋病綜合征，最后并發(fā)各種嚴(yán)重機(jī)會(huì)性感染和惡性腫瘤，成為AIDS，病死率極高。到目前為止，還沒有找到一種治愈該病的方法。1． 病原學(xué)1．1 HIV是單鏈RNA病毒，屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科，慢病毒屬，包括HIV1型和HIV2型，兩者均能引起AIDS。但多數(shù)AIDS乃由HIV1型引起。HIV既有嗜淋巴細(xì)胞性又有嗜神經(jīng)性，主要感染CD4+T淋巴細(xì)胞，也能感染單核巨噬細(xì)胞，B細(xì)胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞等。1．2 HIV的抵抗力：HIV對(duì)外界抵抗力較弱，對(duì)熱敏感，56℃30分鐘能滅活。25%以上濃度的酒精即能滅活病毒，70%的效果最好；%次氯酸鈉、5%～8%甲醛及有機(jī)氯溶液等均能滅活病毒。%甲醛溶液、紫外線和γ射線不敏感。在實(shí)驗(yàn)室條件下，HIV在干燥環(huán)境中很快失去活性，在厚血塊中可存活十幾天，在干燥的玻璃上可維持幾天。美國CDC證明干燥環(huán)境中的HIV濃度在幾小時(shí)內(nèi)降低90%～99%。2． 流行病學(xué)2．1 傳染源：病人和無癥狀病毒攜帶者是主要的傳染源，前者的傳染性最強(qiáng)，后者在流行病學(xué)上意義更大。病毒主要存在于血液、精液、子宮和陰道分泌物中；乳汁、唾液、淚水等均能檢出病毒。2．2 傳播途徑：世界公認(rèn)的傳播途徑有三種，即性傳播、血液傳播及母嬰傳播。2．3 人群易感性：各個(gè)年齡均可感染，但同性戀和性亂交者，靜脈毒癮者，血友病患者，接受血、血制品或器官移植者，父母是HIV感染者的兒童，受感染檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件的危險(xiǎn)性比較大，屬高危人群，發(fā)病年齡主要為40歲以下的青狀年。3． 臨床表現(xiàn)本病潛伏期較長，HIV1侵入機(jī)體后2～10年左右可以發(fā)展為AIDS，HIV2所需的時(shí)間更長。HIV感染人體后分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四期，HIV對(duì)CD4+T淋巴細(xì)胞有特殊的親嗜性，發(fā)病與HIV含量、毒力、變異及CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量、功能和機(jī)體免疫狀況有關(guān)。臨床上可表現(xiàn)為原因不明的免疫缺陷，往往以淋巴結(jié)腫大、厭食、慢性腹瀉、體重減輕、發(fā)熱、乏力等全身癥狀起病，逐漸發(fā)展至各種機(jī)會(huì)性感染、繼發(fā)性腫瘤、精神神經(jīng)障礙而死亡。4． 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ郊拔：σ蛩胤治?．1 HIV抗體和抗原檢測：最常用的樣品是血液，包括血清、血漿和全血。HIV的主要傳播途徑就是血液傳播，在進(jìn)行采樣和檢測等過程中，都可能接觸到血液，因此對(duì)于未知樣品的檢測具有潛在危險(xiǎn)性；而對(duì)于直接接觸HIV感染者或艾滋病病人血液和體液時(shí)，實(shí)驗(yàn)危險(xiǎn)性較高，更應(yīng)注意個(gè)人防護(hù)。4．2 HIV核酸檢測：樣品有全血、血漿、組織和其他分泌物，有時(shí)還包括生物制品，此類標(biāo)本具有潛在危險(xiǎn)性，對(duì)于HIV感染者或艾滋病病人的樣品，實(shí)驗(yàn)危險(xiǎn)性較高。4．3 HIV病毒培養(yǎng)：培養(yǎng)物中含大量的HIV，對(duì)于實(shí)驗(yàn)人員具有相當(dāng)高的傳染危險(xiǎn)性。應(yīng)該在P3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行操作，同時(shí)嚴(yán)格做好個(gè)人防護(hù)工作。5．安全保障措施5．1 個(gè)人防護(hù)5．1．1 高標(biāo)準(zhǔn)的個(gè)人保健對(duì)于減少感染的危險(xiǎn)性很重要。皮膚受損、生病都會(huì)增加感染的危險(xiǎn)性。皮膚的傷口和擦傷都應(yīng)以防水敷料覆蓋。5．1．2 進(jìn)實(shí)驗(yàn)室前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。5．1．3 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿隔離衣，戴手套。如果接觸物傳染危險(xiǎn)性大，則應(yīng)戴雙層手套和防護(hù)眼鏡。檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件5．1．4 離開實(shí)驗(yàn)室前必須脫去隔離衣并洗手。5．1．5 嚴(yán)禁在艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化妝。5．1．6 減少實(shí)驗(yàn)室內(nèi)利器的使用。5．2 帶入和帶出實(shí)驗(yàn)室的物品5．2．1 對(duì)所有帶入實(shí)驗(yàn)室的物品都應(yīng)進(jìn)行檢查。含有測試樣品的包裹應(yīng)在安全柜或其他適當(dāng)?shù)难b置內(nèi)打開。5．2．2 將HIV測試樣品轉(zhuǎn)送其他實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)防止對(duì)人員和環(huán)境的污染。護(hù)送樣品的人應(yīng)明確接收地點(diǎn)和接收人，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或其指定的人員應(yīng)及時(shí)確認(rèn)樣品已送達(dá)指定的實(shí)驗(yàn)室，被轉(zhuǎn)入安全位置并得到妥善處理。5．2．3 污染或可能造成污染的材料在帶出實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)進(jìn)行消毒。5．3 消毒方法5．3．1 廢棄物缸：10%（V/V）次氯酸鈉（含10，000ppm有效氯）。5．3．2 生物安全柜工作臺(tái)面和儀器表面：70%乙醇。5．3．3 溢出物：10%次氯酸鈉（V/V）。5．3．4 污染的臺(tái)面和器具：40%甲醛水溶液，也可以用過氧化氫或過氧乙酸檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件第三章 結(jié)核分枝桿菌的生物危害評(píng)估報(bào)告結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌（偶爾可由牛型或非洲型分枝桿菌）引起的一種細(xì)菌性疾病。結(jié)核病可累及全身各個(gè)器官，但以肺結(jié)核最為常見。該病具有傳染性強(qiáng)，散播面廣，不分地域均可發(fā)生。結(jié)核病可由呼吸道、消化道、皮膚等途徑感染，但其主要傳播途徑是以空氣為傳播因子的呼吸道傳染，而排菌的肺結(jié)核病人傳染性更大，是傳播感染的主要傳染源。傳播途徑呼吸道感染（respirator tract infection）是肺結(jié)核的主要傳染途徑（routes of infection），飛沬傳染（droplet infection）為最常見的方式。傳染源主要是排菌的肺結(jié)核患者（尤其是痰涂片陽性未經(jīng)治療者）。飛沬核（droplet nuclei）＜ 10μm時(shí)可被吸人呼吸道，健康人可因吸入患者咳嗽、打噴嚏時(shí)噴出的帶菌飛沫而受感染。 危害程度分級(jí)微生物按其是否致病、致病力強(qiáng)弱、危害人體的嚴(yán)重性、傳染性的大小、臨近人群的抵抗力、有無免疫制劑和特效治療藥物等綜合評(píng)價(jià)，可分為四個(gè)不同的危害等級(jí)。結(jié)核分枝桿菌屬于3級(jí)危險(xiǎn)。3級(jí)危險(xiǎn)（對(duì)個(gè)體具有極大危害，對(duì)群體具有較大的危害性）：指有特殊危險(xiǎn)的致病菌。感染后癥狀較重，并可能危及生命，或者缺乏有效的預(yù)防方法、發(fā)病后不易治療的微生物。實(shí)驗(yàn)室感染的原因及預(yù)防（一）技術(shù)操作可能導(dǎo)致的感染及其預(yù)防措施。1. 接種：應(yīng)使用無彈力的鉑絲接種環(huán)，結(jié)核菌接種后接種環(huán)火焰滅菌易崩散，酒精燈燒灼時(shí)要特別注意。2. 混勻：吸管吸吹菌液時(shí)不要產(chǎn)生氣泡，應(yīng)沿容器壁排出。3. 研磨：最好使用組織研磨器，乳缽易產(chǎn)生氣溶膠。4. 移液：吸管上端的棉花松緊要適度，吸液時(shí)要從管底吸取，吹出時(shí)要輕緩，不要全部吹凈，以免產(chǎn)生氣泡，形成氣溶膠。5. 開封：要避免壓力和氣流的急劇變化。6. 離心：離心管套底墊要完好，使用匹配的管、套、離心頭，加蓋。7. 注射：做好個(gè)人防護(hù)，正確使用注射器。8. 搬運(yùn)：室內(nèi)移動(dòng)要避免滑落，移出室外要有堅(jiān)實(shí)密閉的外包裝。（二）技術(shù)保障1. 雙人原則，不允許單人操作2類病原。2. 入口處應(yīng)有危險(xiǎn)警示標(biāo)識(shí)，并標(biāo)明所操作的微生物的種類。3. 培訓(xùn)考核上崗，掌握相關(guān)技術(shù)操作要領(lǐng)，熟悉規(guī)章制度，適應(yīng)工作環(huán)境。4. 完備的管理措施，技術(shù)操作規(guī)范。5. 良好的工作行為可降低生物危害風(fēng)險(xiǎn)。實(shí)驗(yàn)室中的分枝桿菌及分枝桿菌氣溶膠檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室工作人員，在分枝桿菌檢驗(yàn)過程中，會(huì)接觸到各種潛在感染源標(biāo)本和各種危險(xiǎn)物，特別是許多操作易產(chǎn)生分枝桿菌氣溶膠。含有結(jié)核分枝桿菌的微滴核（15微米）通過呼吸進(jìn)入人體肺泡，可以黏附在肺泡內(nèi)生長繁殖。因此，首先要對(duì)實(shí)驗(yàn)室中生物危險(xiǎn)物產(chǎn)生的途徑和存在的地點(diǎn)有充分的認(rèn)識(shí)，以便明確生物安全防護(hù)的環(huán)節(jié)。(一) 分枝桿菌存在的地點(diǎn) 各種臨床標(biāo)本，通常是痰，胃或支氣管灌洗液、腦脊液、尿液等。 被污染的操作臺(tái)、器械、儀器、試劑等。 收集的結(jié)核分枝桿菌、非結(jié)核分枝桿菌菌株等。 細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室的部分區(qū)域。(二) 產(chǎn)生分枝桿菌氣溶膠 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)可疑肺結(jié)核患者痰標(biāo)本的采集。 樣本的制備和涂片的火焰固定。 分離培養(yǎng)或接種培養(yǎng)物。 用火焰燒灼接種環(huán)。 使用移液器混合培養(yǎng)物。 培養(yǎng)管或培養(yǎng)瓶中含有培養(yǎng)物的滴落物。 溢出的分枝桿菌懸浮液。 高速混合含有分枝桿菌的液體。 轉(zhuǎn)移液態(tài)培養(yǎng)物和上清液，或培養(yǎng)液、上清液的傾倒。 離心過程中離心管的破碎。 1用做原代培養(yǎng)所需的組織勻漿。安全防護(hù) (一) 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程，任何時(shí)侯都要警惕分枝桿菌氣溶膠的產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員必須經(jīng)過生物安全培訓(xùn)后方可上崗。 (二) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格限制非實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入，減少實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外交叉生物污染。完成實(shí)驗(yàn)工作離開實(shí)驗(yàn)室，要關(guān)好門窗。 (三) 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)避免攜帶非必需物品。 (四) 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，工作人員應(yīng)穿著工作服，操作時(shí)應(yīng)穿戴防護(hù)隔離衣、口罩、帽子和手套，長發(fā)者應(yīng)將頭發(fā)裝束在帽子內(nèi)。 (五) 實(shí)驗(yàn)過程中絕對(duì)禁止吸煙、飲食等，不要以手撫頭面部等。 (六) 試驗(yàn)前須開啟紫外線燈對(duì)實(shí)驗(yàn)室和操作區(qū)域進(jìn)行照射消毒1小時(shí)以上；試驗(yàn)結(jié)束后，立即開啟紫外燈進(jìn)行照射消毒2小時(shí)以上。 (七) 任何試驗(yàn)的開始和結(jié)束后，操作人員要用70%酒精浸泡雙手或仔細(xì)擦后，用清潔劑或清水洗凈。 (八) 每次試驗(yàn)結(jié)束后，必須清理好實(shí)驗(yàn)臺(tái)，并用70%酒精液或35%石炭酸擦洗實(shí)驗(yàn)臺(tái)面。(九) 實(shí)驗(yàn)室中的生物危險(xiǎn)品要根據(jù)檢查項(xiàng)目和性質(zhì)不同，局限在相應(yīng)的試驗(yàn)區(qū)間，不得隨意將其帶到其它的實(shí)驗(yàn)室。(十) 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)任何微生物的樣本，廢棄物都必須經(jīng)高溫高壓滅菌后，方可按一般垃圾處理。安全保障 (一) 首先各級(jí)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按等級(jí)要求完善實(shí)驗(yàn)設(shè)施，如簡易安全柜內(nèi)的抽氣排風(fēng)功能、紫外燈消毒功能，生物安全柜維護(hù)與除菌濾膜定期更換等。 (二) 實(shí)驗(yàn)室采集病人痰標(biāo)本時(shí)應(yīng)在戶外進(jìn)行，避免因病人咳漱造成室內(nèi)氣溶膠污染。 (三) 普通實(shí)驗(yàn)室應(yīng)注意氣流方向，實(shí)驗(yàn)過程中盡量避免強(qiáng)氣流變化而產(chǎn)生氣溶膠（如﹕涂片、染色過程中）。 (四) 細(xì)菌的分離培養(yǎng)、菌種開封、轉(zhuǎn)種、研磨、稀釋等操作，各級(jí)實(shí)驗(yàn)室均應(yīng)在簡易安全柜或生物安全柜中進(jìn)行。 (五) 使用接種環(huán)進(jìn)行操作時(shí)，接種環(huán)應(yīng)在工作燈的內(nèi)焰中燃燒，以避免菌液或菌塊飛濺。 (六) 稀釋菌液時(shí)，吸管、針管要緩慢插入試管或燒瓶底部，小心操作避免產(chǎn)生氣泡或氣溶膠。 (七) 使用注射器加樣時(shí)，用過的針頭切勿再重新入套或拔開注射器與針頭，應(yīng)直接放入銳器收集器，以免劃破皮膚造成接種感染。 (八) 菌株庫要設(shè)專人管理，并按照國家微生物菌毒種管理辦法執(zhí)行。 (九) 進(jìn)行毒菌操作過程中，不要穿戴巳經(jīng)污染的防護(hù)性手套觸摸門柄、儀器或毒菌區(qū)以外區(qū)域，避免由于粗心擴(kuò)大污染范圍。 (十) 試驗(yàn)結(jié)束后，操作過程中所有可能與生物危險(xiǎn)物接觸或被污染的試驗(yàn)器械和物品，能夠高壓消毒的必須高壓消毒，不能進(jìn)行高壓消毒的設(shè)備、儀器，應(yīng)使用有效的消毒劑擦洗后再以紫外燈近距離長時(shí)間消毒。 (十一)實(shí)驗(yàn)中發(fā)生意外污染情況，應(yīng)立即通知主管人員并做好處理污染物和相應(yīng)區(qū)域的準(zhǔn)備，不得擅自采用其它禁止的方法進(jìn)行消毒處理。 (十二)實(shí)驗(yàn)室主任應(yīng)制定規(guī)章和程序，只有告知潛在風(fēng)險(xiǎn)并符合進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室特殊要求(如，經(jīng)過免疫接種)的人，才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。 (十三)操作致病性微生物時(shí)，實(shí)驗(yàn)室入口處應(yīng)貼有生物危險(xiǎn)標(biāo)志，并顯示以下信息：有關(guān)病原、生物安全級(jí)別、免疫接種要求、研究人員姓名、電話號(hào)碼、在實(shí)驗(yàn)室中必須佩帶的個(gè)人防護(hù)設(shè)施、出實(shí)驗(yàn)室所要求的程序。 (十四)實(shí)驗(yàn)室主任為實(shí)驗(yàn)室人員特別制定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序或生物安全手冊(cè)中，應(yīng)包括生物安全程序。對(duì)于有特殊風(fēng)險(xiǎn)的人員，要求閱讀并在工作及程序上遵照?qǐng)?zhí)行。 (十五)實(shí)驗(yàn)室主任保證實(shí)驗(yàn)及其輔助人員接受適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)，包括和工作有關(guān)的可能存在的風(fēng)險(xiǎn)、防止暴露的必要措施和暴露評(píng)估程序。 （十六）實(shí)驗(yàn)室所用任何個(gè)人防護(hù)裝備應(yīng)符合國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確保具備足夠的有適當(dāng)防護(hù)水平的清潔防護(hù)服供使用。還應(yīng)穿戴其它的個(gè)人防護(hù)裝備，如手套、防護(hù)鏡、面具、頭部面部保護(hù)罩等。 (十七)處理樣本的過程中易產(chǎn)生高危害氣溶膠時(shí)，要求同時(shí)使用適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備、生物安全柜和/或其它物理防護(hù)設(shè)備。如可產(chǎn)生含生物因子的氣溶膠，應(yīng)在適當(dāng)?shù)纳锇踩裰胁僮鳌?十八) 實(shí)驗(yàn)用鞋應(yīng)舒適，鞋底防滑。應(yīng)用皮制或合成材料的不滲液體的鞋類。在從事可能出現(xiàn)漏出的工作時(shí)可穿一次性防水鞋套。在實(shí)驗(yàn)室的特殊區(qū)域（例如有防靜電要求的區(qū)域）或BSL3和BSL4實(shí)驗(yàn)室要求使用專用鞋（例如一次性或橡膠靴子）。結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室廢物處理 一、實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理的目的： (一) 將操作、收集、運(yùn)輸、處理及處置廢棄物的危險(xiǎn)減至最??； (二) 將實(shí)驗(yàn)室廢棄物對(duì)環(huán)境的有害作用減至最小。二、實(shí)驗(yàn)室污物處理及消毒 (一) 實(shí)驗(yàn)室含有生物危險(xiǎn)物的臨床標(biāo)本及被污染的一次性用品，試驗(yàn)完成后，應(yīng)在操作臺(tái)或?qū)嶒?yàn)區(qū)域內(nèi)以紫外燈近距離照射消毒 2小時(shí)以上，再經(jīng)高壓消毒后方可丟棄或焚燒。 (二) 可重復(fù)使用的實(shí)驗(yàn)用品及器材，完成實(shí)驗(yàn)后，應(yīng)在操作臺(tái)或?qū)嶒?yàn)區(qū)域內(nèi)經(jīng)紫外燈近距離照射消毒2小時(shí)以上后，再交有關(guān)人員進(jìn)行高壓消毒和煮沸洗刷。 (三) 實(shí)驗(yàn)用的試管、吸管、注射器，須裝在加蓋不漏的容器內(nèi)，經(jīng)高壓滅菌后取出。 (四) 培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)室垃圾，在丟棄前必須經(jīng)高壓消毒和紫外燈近距離長時(shí)間照射處理。不允許積存垃圾和實(shí)驗(yàn)室廢棄物。已裝滿的容器應(yīng)定期運(yùn)走。在去污染或最終處置之前，應(yīng)存放在指定的安全地方，通常在實(shí)驗(yàn)室區(qū)內(nèi)。 (五) 實(shí)驗(yàn)室廢棄物應(yīng)置于適當(dāng)?shù)拿芊馇曳缆┤萜髦邪踩\(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。有害氣體、氣溶膠、污水、廢液應(yīng)經(jīng)適當(dāng)?shù)臒o害化處理后排放，應(yīng)符合國家相關(guān)的要求。