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實(shí)驗(yàn)室病原微生物危害評(píng)估報(bào)告-閱讀頁

2025-04-22 03:24本頁面
  

【正文】 1,H9N2)通過何種途徑傳染人至今不清楚,因此采集標(biāo)本時(shí),須做好一定的個(gè)人防護(hù)。3. 安全措施3.1嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)室使用和安全操作技術(shù)規(guī)程及各個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的操作技術(shù)規(guī)程操作。采用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的口罩、防護(hù)服等個(gè)人防護(hù)用品,3.3強(qiáng)化離心、移液等環(huán)節(jié)的標(biāo)準(zhǔn)操作。檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件第六章 梅毒螺旋體的生物危害評(píng)估報(bào)告梅毒螺旋體學(xué)名為蒼白密螺旋體(Treponema pallidum)是梅毒病的病原體。梅毒螺旋體(如圖)是小而纖細(xì)的螺旋狀微生物,長度為520nm,平均約810um,有6—12個(gè)螺旋;肉眼看不到,在光鏡暗視野下,人們僅能看到梅毒螺旋體的折光性,其活動(dòng)較強(qiáng)。在未受外界因素的影響時(shí),螺旋是規(guī)則的。梅毒螺旋體是厭氧菌,在體內(nèi)可長期生存繁殖,只要條件適宜,便以橫斷裂方式一分為二的進(jìn)行繁殖。梅毒螺旋體在人體外生存一般超不過1~2個(gè)小時(shí)。梅毒螺旋體不耐高溫,40℃~60℃時(shí)2~3分鐘就能死亡,100℃時(shí)則即刻死亡。如將衣物放于陽光下曝曬,放在干燥的環(huán)境中儲(chǔ)存;將用具煮沸消毒或用化學(xué)用品消毒,都能殺滅梅毒螺旋體,阻止它的傳播。梅毒通過性行為可以在人群中相互傳播,并可以由母親傳染給胎兒,危及下一代。在性傳播疾病中,梅毒的患病人數(shù)是低的,但由于其病程長,危害性大,應(yīng)予重視?! 。ǘ┭鍖W(xué)檢查1.非螺旋體抗原試驗(yàn):是用正常牛心肌的心類脂(Cardiolipin)作為抗原,檢測病人血清中的反應(yīng)素。另外,還可用不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)(USR),其抗原是UDRL抗原的改良,敏感性和特異性與UDRL相似。本試驗(yàn)所用抗原是非特異的,檢測的抗體時(shí)應(yīng)排除假陽性反應(yīng),結(jié)合病史,臨床表現(xiàn)及多次的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。 (1)熒光密螺旋體抗體吸收試驗(yàn)(FTA~ABS):為間接熒光抗體法,其敏感性及特異性均高,常用于梅毒的早期診斷。用活梅毒螺旋體(Nichol株)加病人新鮮血清,35℃培養(yǎng)16小時(shí),同法作正常血清對(duì)照,然后用暗視野顯微鏡觀察活動(dòng)的螺旋體數(shù)目,如試驗(yàn)標(biāo)本活動(dòng)的螺旋體數(shù)目小于或等于對(duì)照血清標(biāo)本內(nèi)的40%,即為陽性。皮膚受損、串病都會(huì)增加感染的危險(xiǎn)性。⑵ 進(jìn)實(shí)驗(yàn)室前要摘除首飾,修剪長的帶刺的指甲,以免刺破手套。如果接觸物傳染危險(xiǎn)性大,則應(yīng)戴雙層手套和防護(hù)眼鏡。⑸ 嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化妝。⑺ 離心:離心管套底墊要完好,使用匹配的管、套、離心頭,加蓋,離心時(shí)要戴好防護(hù)眼鏡。含有測試樣品的包裹應(yīng)在安全柜或其他適當(dāng)?shù)难b置內(nèi)打開。 消毒方法⑴ 廢棄物缸:10%(V/V)次氯酸鈉(含10,000ppm有效氯)。⑶ 溢出物:10%次氯酸鈉(V/V)。檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件第七章 SARS冠狀病毒的生物危害評(píng)估報(bào)告世界衛(wèi)生組織宣布SARS是冠狀病毒的一個(gè)變種,是引起非典型性肺炎的病原體。病毒粒子外包著脂肪膜,膜表面有三種糖蛋白:刺突糖蛋白(S,Spike Protein,是受體結(jié)合位點(diǎn)、溶細(xì)胞作用和主要抗原位點(diǎn));小包膜糖蛋白(E,Envelope Protein,較小,與包膜結(jié)合的蛋白);膜糖蛋白(M,Membrane Protein,負(fù)責(zé)營養(yǎng)物質(zhì)的跨膜運(yùn)輸、新生病毒出芽釋放與病毒外包膜的形成)。冠狀病毒的核酸為非節(jié)段單鏈(+)RNA,長2731kd,是RNA病毒中最長的RNA核酸鏈,具有正鏈RNA特有的重要結(jié)構(gòu)特征:即RNA鏈5’端有甲基化“帽子”,3’端有PolyA “尾巴”結(jié)構(gòu)。冠狀病毒的RNA和RNA之間重組率非常高,病毒出現(xiàn)變異正是由于這種高重組率。而抗原性發(fā)生變化的結(jié)果是導(dǎo)致原有疫苗失效,免疫失敗。再利用這個(gè)酶完成負(fù)鏈亞基因組RNA(subgenomic RNA)的轉(zhuǎn)錄合成、各種結(jié)構(gòu)蛋白mRNA的合成,以及病毒基因組RNA的復(fù)制。結(jié)構(gòu)蛋白和基因組RNA復(fù)制完成后,將在宿主細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)處裝配(assembly)生成新的冠狀病毒顆粒,并通過高爾基體分泌至細(xì)胞外,完成其生命周期。   到目前為止,大約有15種不同冠狀病毒株被發(fā)現(xiàn),能夠感染多種哺乳動(dòng)物和鳥類,有些可使人發(fā)病。該病毒對(duì)溫度很敏感,在33℃時(shí)生長良好,但35℃就使之受到抑制。冠狀病毒是成人普通感冒的主要病原之一,兒童感染率較高,主要是上呼吸道感染,一般很少波及下呼吸道。   病毒的生長多位于上皮細(xì)胞內(nèi),也可以感染肝臟、腎、心臟和眼睛,在另外的一些細(xì)胞類型(例如巨噬細(xì)胞)中也能生長。動(dòng)物疾病模型主要用于實(shí)驗(yàn)生理學(xué)、實(shí)驗(yàn)病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)治療學(xué)(包括新藥篩選)研究),因此對(duì)冠狀病毒的分離工作難度很大,需用人肝臟細(xì)胞、氣管及鼻黏膜細(xì)胞,經(jīng)器官培養(yǎng)才能分離得到。   冠狀病毒的血清型和抗原變異性還不明確。 傳播途徑冠狀病毒通過呼吸道分泌物排出體外,經(jīng)口液、噴嚏、接觸傳染,并通過空氣飛沫傳播,感染高峰在秋冬和早春。預(yù)防及安全措施 對(duì)其預(yù)防有特異性預(yù)防,即針對(duì)性預(yù)防措施(疫苗,疫苗的研制是有可能的,但需要時(shí)間較長,解決病毒繁殖問題是其難題)和非特異性預(yù)防措施(即預(yù)防春季呼吸道傳染疾病的措施,如保暖、洗手、通風(fēng)、勿過度疲勞及勿接觸病人,少去人多的公共場所等)。⑵加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)。⑷抗體檢測用血清標(biāo)本可先以56℃30分鐘處理。流行性乙型腦炎的病原體。低溫條件下,能自下而上較長時(shí)間,在動(dòng)物、雞胚及組織培養(yǎng)細(xì)胞中均能增殖。當(dāng)人受帶病毒的蚊子叮咬后,乙腦病毒進(jìn)入人體,在血管內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴結(jié)、肝、脾等吞噬細(xì)胞內(nèi)增殖,并經(jīng)血液循環(huán)到達(dá)腦部而引起炎癥。重癥者可周身高燒、抽痙不止、腦水腫、呼吸或循環(huán)衰竭而死亡。消滅蚊子孳生地,并撲滅越冬蚊和新生成蚊是預(yù)防乙腦的關(guān)鍵。人體接種疫苗可提高對(duì)乙腦病毒感染的抵抗力,對(duì)預(yù)防乙腦也有良好效果。早期住院、中西醫(yī)結(jié)合治療,可以大大提高治愈率,減少后遺癥。1950年以來,我國對(duì)該病進(jìn)行了大量病原學(xué)和流行病學(xué)研究,為了與甲型腦炎相區(qū)別,定名為流行性乙型腦炎,簡稱乙腦,是我國夏秋季流行的主要傳染病之一,除新疆、西藏、青海外,全國各地均有病例發(fā)生,病死率10%,大約15%的患者留有不同程度的后遺癥。病毒基因組為單股正鏈RNA,全長11kb,自5′至3′端依次編碼結(jié)構(gòu)蛋白C、M、E以及非結(jié)構(gòu)蛋白NS1—NS5,病毒RNA在細(xì)胞漿內(nèi)直接起mRNA作用,翻譯出結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白,在胞漿粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)裝配成熟,出芽釋放。  BHK細(xì)胞系、C6/36細(xì)胞系及雞胚成纖維細(xì)胞是常用的敏感細(xì)胞,病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖引起細(xì)胞圓縮、顆粒增多、細(xì)胞脫落等CPE。細(xì)胞培養(yǎng)增殖病毒簡便易行,已取代動(dòng)物培養(yǎng)用物制備疫苗、診斷抗原,以及研究病毒復(fù)制機(jī)理、篩選抗病毒藥物等。E糖蛋白上有中和抗原表位和血凝抗原表位,可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件和血凝抑制抗體,在感染與免疫中重要作用。不同特異性單克隆抗體已用于研究乙腦病毒抗原結(jié)構(gòu)與功能以及鑒定新分離的毒株,解決了常規(guī)免疫血清特異性低的問題。病毒血凝素與紅細(xì)胞結(jié)合是不可逆的,但這種病毒與紅細(xì)胞形成的復(fù)合物仍有感染性,加入特異性抗體可抑制這種血凝現(xiàn)象。若將感染病毒的腦組織加入50%甘油緩沖鹽水中貯存在4℃,其病毒活力可維持?jǐn)?shù)月。在酸性條件下不穩(wěn)定,~。蚊感染病毒后,中腸細(xì)胞為最初復(fù)制部位,經(jīng)病毒血癥侵犯唾液腺和神經(jīng)組織,并再次復(fù)制,終身帶毒并可經(jīng)卵傳代,成為傳播媒介和貯存宿主。在溫帶,鳥類是自然界中的重要貯存宿主。有關(guān)病毒越冬的方式可為:①越冬蚊再感染鳥類,建立新的鳥—蚊—鳥循環(huán);②病毒可在鳥、哺乳動(dòng)物、節(jié)肢動(dòng)物體潛伏越冬?! 〖倚蠛图仪菰诹餍屑竟?jié)感染乙腦病毒,一般為隱性感染,但病毒在其體內(nèi)可增殖,侵入血流,引起短暫的病毒血癥,成為乙腦病毒的暫時(shí)貯存宿主,經(jīng)蚊叮咬反復(fù)傳播,成為人類的傳染源?! ‘?dāng)帶毒雌蚊叮咬人時(shí),病毒隨蚊蟲唾液傳入人體皮下。約經(jīng)4~7日潛伏期后,在體內(nèi)增殖的大量病毒,再侵入血流成為第二次病毒血癥,引起發(fā)熱、寒戰(zhàn)及全身不適等癥狀,若不再繼續(xù)發(fā)展者,即成為頓挫感染,數(shù)日后可自愈;但少數(shù)患者(%)體內(nèi)的病毒可通過血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)增殖,引起腦膜及腦組織發(fā)炎,造成神經(jīng)元細(xì)胞變性壞死、毛細(xì)血管栓塞、淋巴細(xì)胞浸潤,甚至出現(xiàn)局灶性壞死和腦組織軟化。重癥患者可能死于檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件呼吸循環(huán)衰竭,部分患者病后遺留失語、強(qiáng)直性痙攣、精神失常等后遺癥。流行區(qū)成人大多數(shù)都有一定免疫力,多為隱性感染,10歲以下兒童及非流行區(qū)成人缺乏免疫力,感染后容易發(fā)病。補(bǔ)體給合抗體在發(fā)病2~3周后方可檢出,約存在半年。流行區(qū)人群每年不斷受到帶病毒的蚊叮咬,逐漸增強(qiáng)免疫力,抗體陽性率常隨年齡而增高,例如北京市20歲以上成年人90%血清中含有中和抗體?! ∪?、微生物學(xué)診斷  乙腦早期快速診斷通常采集性期患者血清或腦脊液特異性lgM ,也可做RT—PCR檢測標(biāo)本中的病毒核酸片段,一般6個(gè)小時(shí)內(nèi)可初步報(bào)告結(jié)果。由于乙腦患者病毒血癥期短,直接檢出病毒抗原或分離病毒陽性率低,較少用于診斷試驗(yàn)。可使用:① lgM 捕捉ELISA法(見23章); ②2ME—NI法,血凝抑制抗體存在于lgM及l(fā)gG中,將早期單份血清分成二份,一份用2巰基乙醇(2ME)處理,以破壞lgM ,另一份不處理,然后同時(shí)做HI試驗(yàn),若處理血清抗體滴度比未處理的下降≥4倍,則為lgM 陽性; ③微量間接免疫熒光法,用熒光素標(biāo)記的抗u鏈血清,檢測已與細(xì)胞抗原片結(jié)合的lgM,根據(jù)特異性熒光顆粒,判斷血清標(biāo)本中的lgM存在。常用于病毒的初步鑒定,確定有無乙腦病毒存在?! ?補(bǔ)體結(jié)合抗體僅存在于lgG 中,病后出現(xiàn)遲,消失快,適用于診斷近期感染。中和試驗(yàn)特異性和敏感性都高,但操作繁雜,需用大量動(dòng)物或組織培養(yǎng)管,需時(shí)較久,不適于臨床診斷常規(guī)使用,而在血清學(xué)流行病學(xué)調(diào)查和病毒鑒定上有價(jià)值。也可接種敏感細(xì)胞(如C6/36細(xì)胞系)分離病毒。我國已篩選出乙腦病毒減毒株,用地鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)制成減毒活疫苗,只需皮下注射一次,安全有效,目前正作現(xiàn)場觀察。流行區(qū)當(dāng)年飼養(yǎng)的仔豬接種乙腦疫苗,以杜絕傳染來源,也可使豬健康成長。  (二)特異治療  目前乙腦治療仍采用對(duì)癥處理及支持療法,有報(bào)道用病毒唑、干擾素、恢復(fù)期血清等治療,可能減輕病勢,但已出現(xiàn)腦炎癥狀者,則無治療效果。第二節(jié) 森林腦炎病毒  森林腦炎病毒(簡稱森腦病毒)由蜱傳播,在春夏季節(jié)流行于俄羅斯及我國東北森林地帶,故稱蘇聯(lián)春夏腦炎病毒(Russian springsummer encephalitis virus)?! ∩帜X炎病毒呈球形,直徑為30~40nm,衣殼二十面體對(duì)稱外有包膜,含血凝素糖蛋白,可能為同一病毒的兩個(gè)亞型。接種猴腦內(nèi),可致四肢麻痹。  本病毒儲(chǔ)存宿主蝙蝠,及哺乳動(dòng)物(刺猬、松鼠、野兔等),這些野生動(dòng)物受染后為輕癥感染或隱性感染,但病毒血癥期限有長有短,如刺猬約23天。當(dāng)蜱叮咬感染的野生動(dòng)物,吸血后病毒侵入蜱體內(nèi)增殖,在其生活周期的各階段,包括幼蟲、稚蟲、成蟲及卵都能攜帶本病毒,并可經(jīng)卵傳代。  本病毒的致病性與乙腦病毒相同,非疫區(qū)易感人被帶有病毒的蜱叮咬后,易感染發(fā)病,另外因喝生羊奶(羊感染時(shí)奶中有病毒或被蜱類污染)而被傳染,約經(jīng)8~14天潛伏期后發(fā)生腦炎,出現(xiàn)肌肉麻痹、萎縮、昏迷致死,少數(shù)痊愈者也常遺留肌肉麻痹。居住在森林疫區(qū)的人,因受少量病毒的隱性感染,血中有中和抗體,對(duì)病毒有免疫力。  分離病毒及血清學(xué)檢驗(yàn)方法與乙腦相同?! ☆A(yù)防此病,可給去森林疫區(qū)的人接種滅活疫苗,效果良好。此外,應(yīng)穿著防護(hù)衣襪,皮膚涂擦鄰苯二甲酸酯(Orthophenyldimethylphthalate),以防被蜱叮咬。淋病雙球菌呈腎形,兩個(gè)凹面相對(duì),大小一致。常存在多核白細(xì)胞內(nèi),橢圓或球形,常成雙排列,無鞭毛、無莢膜、不形成芽孢,對(duì)外界理化條件的抵抗力差,最怕干燥,在干燥環(huán)境中12 小時(shí)即可死亡。對(duì)各種化學(xué)消毒劑的抵抗力也很弱。24小時(shí)以后癥狀加劇,紅腫發(fā)展到整個(gè)YJ頭及部分尿道,分泌物由稀薄轉(zhuǎn)變?yōu)樯铧S色的膿液,出現(xiàn)尿頻、尿痛、排尿困難、行動(dòng)不便,入晚YJ常有痛性勃起。兩側(cè)腹股溝淋巴結(jié)亦可受到感染而引起紅腫疼痛,甚至化膿。最常見的感染部位為宮頸、尿道、尿道旁腺、子宮內(nèi)膜及輸卵管。1020%婦女伴有盆腔炎、繼發(fā)不育或?qū)m外孕等婦科疾病?! D女陰道炎 由于小孩陰道是由柱狀上皮所包圍,極易被淋病雙球菌感染,會(huì)陰部紅腫,陰道及尿道有綠色分泌物,排尿疼痛,有時(shí)累及肛門。因此淋病孕婦的新生兒應(yīng)該用硝酸銀滴眼預(yù)防。男性淋病少部分是由性交接觸引起的,女性淋病也可由性交直接感染,也可由其他方式感染。也可通過被患者分泌物污染的衣服、被褥、便盆、醫(yī)療器械而間接傳染,特別是幼女常通過間接途徑而被感染;新生兒可通過患淋病孕婦的產(chǎn)道而被感染,引起淋菌性結(jié)膜炎。檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件  2.非性接觸傳染(間接傳染):此種情況也較多,主要是接觸病人含淋病雙球菌的分泌物或被污染的用具,如沾有分泌物的毛巾、腳布腳盆、衣被,甚至于廁所的馬桶圈等均可傳染,特別是女性(包括幼女),因其尿道和生殖道短,很易感染?! 〕扇颂貏e是男性淋病20%30%屬于性交傳染。調(diào)查資料表明,在淋病患者中男女一次性交感染率為22%35%;男女雙方感染率是男性易于傳染給女性。男性與女性病人性交感染率平均為19%25%,2次為35%,3次為49%,4次為57%。感染后淋菌侵入男性前尿道、女性尿道及宮頸等處,由于其表面的菌毛含有粘附因子,因而粘附到柱狀上皮細(xì)胞的表面進(jìn)行繁殖,并沿生殖道上行,通過柱狀上皮細(xì)胞的吞噬作用而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)繁殖,導(dǎo)致細(xì)胞溶解破裂,淋球菌遂被排至細(xì)胞外的粘膜下層。當(dāng)細(xì)菌進(jìn)入尿道腺體和隱窩后,腺管開口及隱窩被阻塞,潛藏的細(xì)菌成為慢性淋病的主要病灶。涂片對(duì)有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者,此法陽性率在90%左右,可以初步診斷。慢性淋病由于分泌物中淋球菌較少,陽性率低,因此要取前列腺按摩液,以提高檢出率。另外對(duì)癥狀不典型的涂片陽性應(yīng)作進(jìn)一步檢查。目前國外推薦選擇培養(yǎng)基有改良的ThayerMartin(TM)培養(yǎng)基和New York City(NYC)培養(yǎng)基。在36℃,70%濕度,含5%10%CO2(燭缸)環(huán)境中培養(yǎng),2448小時(shí)觀察結(jié)果。培養(yǎng)陽性率男性80%95%,女性8090%?! ?.直接免疫熒光試驗(yàn):通過檢測淋球菌外膜蛋白I的單克隆抗體作直接免疫熒光試驗(yàn)?! 。ㄋ模┗蛟\斷  1.淋球菌的基因探針診斷 淋球菌的基因
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