【正文】 1，H9N2）通過何種途徑傳染人至今不清楚，因此采集標本時，須做好一定的個人防護。3． 安全措施3．1嚴格按實驗室使用和安全操作技術規(guī)程及各個實驗項目的操作技術規(guī)程操作。采用符合國家標準的口罩、防護服等個人防護用品，3．3強化離心、移液等環(huán)節(jié)的標準操作。檢驗科質量管理體系文件第六章 梅毒螺旋體的生物危害評估報告梅毒螺旋體學名為蒼白密螺旋體(Treponema pallidum)是梅毒病的病原體。梅毒螺旋體（如圖）是小而纖細的螺旋狀微生物，長度為520nm，平均約810um，有6—12個螺旋；肉眼看不到，在光鏡暗視野下，人們僅能看到梅毒螺旋體的折光性，其活動較強。在未受外界因素的影響時，螺旋是規(guī)則的。梅毒螺旋體是厭氧菌，在體內可長期生存繁殖，只要條件適宜，便以橫斷裂方式一分為二的進行繁殖。梅毒螺旋體在人體外生存一般超不過1～2個小時。梅毒螺旋體不耐高溫，40℃～60℃時2～3分鐘就能死亡，100℃時則即刻死亡。如將衣物放于陽光下曝曬，放在干燥的環(huán)境中儲存；將用具煮沸消毒或用化學用品消毒，都能殺滅梅毒螺旋體，阻止它的傳播。梅毒通過性行為可以在人群中相互傳播，并可以由母親傳染給胎兒，危及下一代。在性傳播疾病中，梅毒的患病人數(shù)是低的，但由于其病程長，危害性大，應予重視?！　。ǘ┭鍖W檢查1．非螺旋體抗原試驗：是用正常牛心肌的心類脂（Cardiolipin）作為抗原，檢測病人血清中的反應素。另外，還可用不加熱血清反應素試驗（USR），其抗原是UDRL抗原的改良，敏感性和特異性與UDRL相似。本試驗所用抗原是非特異的，檢測的抗體時應排除假陽性反應，結合病史，臨床表現(xiàn)及多次的試驗結果進行分析。 （1）熒光密螺旋體抗體吸收試驗（FTA～ABS）：為間接熒光抗體法，其敏感性及特異性均高，常用于梅毒的早期診斷。用活梅毒螺旋體（Nichol株）加病人新鮮血清，35℃培養(yǎng)16小時，同法作正常血清對照，然后用暗視野顯微鏡觀察活動的螺旋體數(shù)目，如試驗標本活動的螺旋體數(shù)目小于或等于對照血清標本內的40%，即為陽性。皮膚受損、串病都會增加感染的危險性。⑵ 進實驗室前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。如果接觸物傳染危險性大，則應戴雙層手套和防護眼鏡。⑸ 嚴禁在實驗室內進食、飲水、吸煙和化妝。⑺ 離心：離心管套底墊要完好，使用匹配的管、套、離心頭，加蓋，離心時要戴好防護眼鏡。含有測試樣品的包裹應在安全柜或其他適當?shù)难b置內打開。 消毒方法⑴ 廢棄物缸：10%（V/V）次氯酸鈉（含10，000ppm有效氯）。⑶ 溢出物：10%次氯酸鈉（V/V）。檢驗科質量管理體系文件第七章 SARS冠狀病毒的生物危害評估報告世界衛(wèi)生組織宣布SARS是冠狀病毒的一個變種，是引起非典型性肺炎的病原體。病毒粒子外包著脂肪膜，膜表面有三種糖蛋白：刺突糖蛋白（S，Spike Protein，是受體結合位點、溶細胞作用和主要抗原位點）；小包膜糖蛋白（E，Envelope Protein，較小，與包膜結合的蛋白）；膜糖蛋白（M，Membrane Protein，負責營養(yǎng)物質的跨膜運輸、新生病毒出芽釋放與病毒外包膜的形成）。冠狀病毒的核酸為非節(jié)段單鏈（＋）RNA，長2731kd，是RNA病毒中最長的RNA核酸鏈，具有正鏈RNA特有的重要結構特征：即RNA鏈5’端有甲基化“帽子”，3’端有PolyA “尾巴”結構。冠狀病毒的RNA和RNA之間重組率非常高，病毒出現(xiàn)變異正是由于這種高重組率。而抗原性發(fā)生變化的結果是導致原有疫苗失效，免疫失敗。再利用這個酶完成負鏈亞基因組RNA（subgenomic RNA）的轉錄合成、各種結構蛋白mRNA的合成，以及病毒基因組RNA的復制。結構蛋白和基因組RNA復制完成后，將在宿主細胞內質網處裝配（assembly）生成新的冠狀病毒顆粒，并通過高爾基體分泌至細胞外，完成其生命周期。 　　到目前為止，大約有15種不同冠狀病毒株被發(fā)現(xiàn)，能夠感染多種哺乳動物和鳥類，有些可使人發(fā)病。該病毒對溫度很敏感，在33℃時生長良好，但35℃就使之受到抑制。冠狀病毒是成人普通感冒的主要病原之一，兒童感染率較高，主要是上呼吸道感染，一般很少波及下呼吸道。 　　病毒的生長多位于上皮細胞內，也可以感染肝臟、腎、心臟和眼睛，在另外的一些細胞類型（例如巨噬細胞）中也能生長。動物疾病模型主要用于實驗生理學、實驗病理學和實驗治療學（包括新藥篩選）研究），因此對冠狀病毒的分離工作難度很大，需用人肝臟細胞、氣管及鼻黏膜細胞，經器官培養(yǎng)才能分離得到。 　　冠狀病毒的血清型和抗原變異性還不明確。 傳播途徑冠狀病毒通過呼吸道分泌物排出體外，經口液、噴嚏、接觸傳染，并通過空氣飛沫傳播，感染高峰在秋冬和早春。預防及安全措施 對其預防有特異性預防，即針對性預防措施（疫苗，疫苗的研制是有可能的，但需要時間較長，解決病毒繁殖問題是其難題）和非特異性預防措施（即預防春季呼吸道傳染疾病的措施，如保暖、洗手、通風、勿過度疲勞及勿接觸病人，少去人多的公共場所等）。⑵加強個人防護。⑷抗體檢測用血清標本可先以56℃30分鐘處理。流行性乙型腦炎的病原體。低溫條件下，能自下而上較長時間，在動物、雞胚及組織培養(yǎng)細胞中均能增殖。當人受帶病毒的蚊子叮咬后，乙腦病毒進入人體，在血管內皮細胞、淋巴結、肝、脾等吞噬細胞內增殖，并經血液循環(huán)到達腦部而引起炎癥。重癥者可周身高燒、抽痙不止、腦水腫、呼吸或循環(huán)衰竭而死亡。消滅蚊子孳生地，并撲滅越冬蚊和新生成蚊是預防乙腦的關鍵。人體接種疫苗可提高對乙腦病毒感染的抵抗力，對預防乙腦也有良好效果。早期住院、中西醫(yī)結合治療，可以大大提高治愈率，減少后遺癥。1950年以來，我國對該病進行了大量病原學和流行病學研究，為了與甲型腦炎相區(qū)別，定名為流行性乙型腦炎，簡稱乙腦，是我國夏秋季流行的主要傳染病之一，除新疆、西藏、青海外，全國各地均有病例發(fā)生，病死率10%，大約15%的患者留有不同程度的后遺癥。病毒基因組為單股正鏈RNA，全長11kb，自5′至3′端依次編碼結構蛋白C、M、E以及非結構蛋白NS1—NS5，病毒RNA在細胞漿內直接起mRNA作用，翻譯出結構蛋白和非結構蛋白，在胞漿粗面內質網裝配成熟，出芽釋放?！　HK細胞系、C6/36細胞系及雞胚成纖維細胞是常用的敏感細胞，病毒在細胞內增殖引起細胞圓縮、顆粒增多、細胞脫落等CPE。細胞培養(yǎng)增殖病毒簡便易行，已取代動物培養(yǎng)用物制備疫苗、診斷抗原，以及研究病毒復制機理、篩選抗病毒藥物等。E糖蛋白上有中和抗原表位和血凝抗原表位，可誘發(fā)機體產生中和抗體檢驗科質量管理體系文件和血凝抑制抗體，在感染與免疫中重要作用。不同特異性單克隆抗體已用于研究乙腦病毒抗原結構與功能以及鑒定新分離的毒株，解決了常規(guī)免疫血清特異性低的問題。病毒血凝素與紅細胞結合是不可逆的，但這種病毒與紅細胞形成的復合物仍有感染性，加入特異性抗體可抑制這種血凝現(xiàn)象。若將感染病毒的腦組織加入50%甘油緩沖鹽水中貯存在4℃，其病毒活力可維持數(shù)月。在酸性條件下不穩(wěn)定，～。蚊感染病毒后，中腸細胞為最初復制部位，經病毒血癥侵犯唾液腺和神經組織，并再次復制，終身帶毒并可經卵傳代，成為傳播媒介和貯存宿主。在溫帶，鳥類是自然界中的重要貯存宿主。有關病毒越冬的方式可為：①越冬蚊再感染鳥類，建立新的鳥—蚊—鳥循環(huán)；②病毒可在鳥、哺乳動物、節(jié)肢動物體潛伏越冬?！　〖倚蠛图仪菰诹餍屑竟?jié)感染乙腦病毒，一般為隱性感染，但病毒在其體內可增殖，侵入血流，引起短暫的病毒血癥，成為乙腦病毒的暫時貯存宿主，經蚊叮咬反復傳播，成為人類的傳染源。　　當帶毒雌蚊叮咬人時，病毒隨蚊蟲唾液傳入人體皮下。約經4～7日潛伏期后，在體內增殖的大量病毒，再侵入血流成為第二次病毒血癥，引起發(fā)熱、寒戰(zhàn)及全身不適等癥狀，若不再繼續(xù)發(fā)展者，即成為頓挫感染，數(shù)日后可自愈；但少數(shù)患者(%)體內的病毒可通過血腦屏障進入腦內增殖,引起腦膜及腦組織發(fā)炎,造成神經元細胞變性壞死、毛細血管栓塞、淋巴細胞浸潤，甚至出現(xiàn)局灶性壞死和腦組織軟化。重癥患者可能死于檢驗科質量管理體系文件呼吸循環(huán)衰竭，部分患者病后遺留失語、強直性痙攣、精神失常等后遺癥。流行區(qū)成人大多數(shù)都有一定免疫力，多為隱性感染，10歲以下兒童及非流行區(qū)成人缺乏免疫力，感染后容易發(fā)病。補體給合抗體在發(fā)病2～3周后方可檢出，約存在半年。流行區(qū)人群每年不斷受到帶病毒的蚊叮咬，逐漸增強免疫力，抗體陽性率常隨年齡而增高，例如北京市20歲以上成年人90%血清中含有中和抗體?！　∪?、微生物學診斷　　乙腦早期快速診斷通常采集性期患者血清或腦脊液特異性lgM ，也可做RT—PCR檢測標本中的病毒核酸片段，一般6個小時內可初步報告結果。由于乙腦患者病毒血癥期短，直接檢出病毒抗原或分離病毒陽性率低，較少用于診斷試驗?？墒褂茫孩?lgM 捕捉ELISA法(見23章)； ②2ME—NI法，血凝抑制抗體存在于lgM及l(fā)gG中，將早期單份血清分成二份，一份用2巰基乙醇(2ME)處理，以破壞lgM ，另一份不處理，然后同時做HI試驗，若處理血清抗體滴度比未處理的下降≥4倍，則為lgM 陽性； ③微量間接免疫熒光法，用熒光素標記的抗u鏈血清，檢測已與細胞抗原片結合的lgM，根據(jù)特異性熒光顆粒，判斷血清標本中的lgM存在。常用于病毒的初步鑒定，確定有無乙腦病毒存在?！　?補體結合抗體僅存在于lgG 中，病后出現(xiàn)遲，消失快，適用于診斷近期感染。中和試驗特異性和敏感性都高，但操作繁雜，需用大量動物或組織培養(yǎng)管，需時較久，不適于臨床診斷常規(guī)使用，而在血清學流行病學調查和病毒鑒定上有價值。也可接種敏感細胞(如C6/36細胞系)分離病毒。我國已篩選出乙腦病毒減毒株，用地鼠腎細胞培養(yǎng)制成減毒活疫苗，只需皮下注射一次，安全有效，目前正作現(xiàn)場觀察。流行區(qū)當年飼養(yǎng)的仔豬接種乙腦疫苗，以杜絕傳染來源，也可使豬健康成長?！　?二)特異治療　　目前乙腦治療仍采用對癥處理及支持療法，有報道用病毒唑、干擾素、恢復期血清等治療，可能減輕病勢，但已出現(xiàn)腦炎癥狀者，則無治療效果。第二節(jié) 森林腦炎病毒　　森林腦炎病毒（簡稱森腦病毒）由蜱傳播，在春夏季節(jié)流行于俄羅斯及我國東北森林地帶，故稱蘇聯(lián)春夏腦炎病毒（Russian springsummer encephalitis virus）?！　∩帜X炎病毒呈球形,直徑為30~40nm，衣殼二十面體對稱外有包膜，含血凝素糖蛋白，可能為同一病毒的兩個亞型。接種猴腦內，可致四肢麻痹?！　”静《緝Υ嫠拗黩穑安溉閯游铮ù题?、松鼠、野兔等），這些野生動物受染后為輕癥感染或隱性感染，但病毒血癥期限有長有短，如刺猬約23天。當蜱叮咬感染的野生動物，吸血后病毒侵入蜱體內增殖，在其生活周期的各階段，包括幼蟲、稚蟲、成蟲及卵都能攜帶本病毒，并可經卵傳代?！　”静《镜闹虏⌒耘c乙腦病毒相同，非疫區(qū)易感人被帶有病毒的蜱叮咬后，易感染發(fā)病，另外因喝生羊奶（羊感染時奶中有病毒或被蜱類污染）而被傳染，約經8～14天潛伏期后發(fā)生腦炎，出現(xiàn)肌肉麻痹、萎縮、昏迷致死，少數(shù)痊愈者也常遺留肌肉麻痹。居住在森林疫區(qū)的人，因受少量病毒的隱性感染，血中有中和抗體，對病毒有免疫力?！　》蛛x病毒及血清學檢驗方法與乙腦相同?！　☆A防此病，可給去森林疫區(qū)的人接種滅活疫苗，效果良好。此外，應穿著防護衣襪，皮膚涂擦鄰苯二甲酸酯（Orthophenyldimethylphthalate）,以防被蜱叮咬。淋病雙球菌呈腎形，兩個凹面相對，大小一致。常存在多核白細胞內，橢圓或球形，常成雙排列，無鞭毛、無莢膜、不形成芽孢，對外界理化條件的抵抗力差，最怕干燥，在干燥環(huán)境中12 小時即可死亡。對各種化學消毒劑的抵抗力也很弱。24小時以后癥狀加劇，紅腫發(fā)展到整個YJ頭及部分尿道，分泌物由稀薄轉變?yōu)樯铧S色的膿液，出現(xiàn)尿頻、尿痛、排尿困難、行動不便，入晚YJ常有痛性勃起。兩側腹股溝淋巴結亦可受到感染而引起紅腫疼痛，甚至化膿。最常見的感染部位為宮頸、尿道、尿道旁腺、子宮內膜及輸卵管。1020%婦女伴有盆腔炎、繼發(fā)不育或宮外孕等婦科疾病?！　D女陰道炎 由于小孩陰道是由柱狀上皮所包圍，極易被淋病雙球菌感染，會陰部紅腫，陰道及尿道有綠色分泌物，排尿疼痛，有時累及肛門。因此淋病孕婦的新生兒應該用硝酸銀滴眼預防。男性淋病少部分是由性交接觸引起的，女性淋病也可由性交直接感染，也可由其他方式感染。也可通過被患者分泌物污染的衣服、被褥、便盆、醫(yī)療器械而間接傳染，特別是幼女常通過間接途徑而被感染；新生兒可通過患淋病孕婦的產道而被感染，引起淋菌性結膜炎。檢驗科質量管理體系文件　　2．非性接觸傳染（間接傳染）：此種情況也較多，主要是接觸病人含淋病雙球菌的分泌物或被污染的用具，如沾有分泌物的毛巾、腳布腳盆、衣被，甚至于廁所的馬桶圈等均可傳染，特別是女性（包括幼女），因其尿道和生殖道短，很易感染?！　〕扇颂貏e是男性淋病20%30%屬于性交傳染。調查資料表明，在淋病患者中男女一次性交感染率為22%35%；男女雙方感染率是男性易于傳染給女性。男性與女性病人性交感染率平均為19%25%，2次為35%，3次為49%，4次為57%。感染后淋菌侵入男性前尿道、女性尿道及宮頸等處，由于其表面的菌毛含有粘附因子，因而粘附到柱狀上皮細胞的表面進行繁殖，并沿生殖道上行，通過柱狀上皮細胞的吞噬作用而進入細胞內繁殖，導致細胞溶解破裂，淋球菌遂被排至細胞外的粘膜下層。當細菌進入尿道腺體和隱窩后，腺管開口及隱窩被阻塞，潛藏的細菌成為慢性淋病的主要病灶。涂片對有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者，此法陽性率在90%左右，可以初步診斷。慢性淋病由于分泌物中淋球菌較少，陽性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高檢出率。另外對癥狀不典型的涂片陽性應作進一步檢查。目前國外推薦選擇培養(yǎng)基有改良的ThayerMartin（TM）培養(yǎng)基和New York City（NYC）培養(yǎng)基。在36℃，70%濕度，含5%10%CO2（燭缸）環(huán)境中培養(yǎng)，2448小時觀察結果。培養(yǎng)陽性率男性80%95%，女性8090%。　　2．直接免疫熒光試驗：通過檢測淋球菌外膜蛋白I的單克隆抗體作直接免疫熒光試驗。　?。ㄋ模┗蛟\斷　　1．淋球菌的基因探針診斷 淋球菌的基因