【正文】 1，H9N2）通過何種途徑傳染人至今不清楚，因此采集標(biāo)本時(shí)，須做好一定的個(gè)人防護(hù)。3． 安全措施3．1嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)室使用和安全操作技術(shù)規(guī)程及各個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的操作技術(shù)規(guī)程操作。采用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的口罩、防護(hù)服等個(gè)人防護(hù)用品，3．3強(qiáng)化離心、移液等環(huán)節(jié)的標(biāo)準(zhǔn)操作。檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件第六章 梅毒螺旋體的生物危害評(píng)估報(bào)告梅毒螺旋體學(xué)名為蒼白密螺旋體(Treponema pallidum)是梅毒病的病原體。梅毒螺旋體（如圖）是小而纖細(xì)的螺旋狀微生物，長度為520nm，平均約810um，有6—12個(gè)螺旋；肉眼看不到，在光鏡暗視野下，人們僅能看到梅毒螺旋體的折光性，其活動(dòng)較強(qiáng)。在未受外界因素的影響時(shí)，螺旋是規(guī)則的。梅毒螺旋體是厭氧菌，在體內(nèi)可長期生存繁殖，只要條件適宜，便以橫斷裂方式一分為二的進(jìn)行繁殖。梅毒螺旋體在人體外生存一般超不過1～2個(gè)小時(shí)。梅毒螺旋體不耐高溫，40℃～60℃時(shí)2～3分鐘就能死亡，100℃時(shí)則即刻死亡。如將衣物放于陽光下曝曬，放在干燥的環(huán)境中儲(chǔ)存；將用具煮沸消毒或用化學(xué)用品消毒，都能殺滅梅毒螺旋體，阻止它的傳播。梅毒通過性行為可以在人群中相互傳播，并可以由母親傳染給胎兒，危及下一代。在性傳播疾病中，梅毒的患病人數(shù)是低的，但由于其病程長，危害性大，應(yīng)予重視?！　。ǘ┭鍖W(xué)檢查1．非螺旋體抗原試驗(yàn)：是用正常牛心肌的心類脂（Cardiolipin）作為抗原，檢測病人血清中的反應(yīng)素。另外，還可用不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR），其抗原是UDRL抗原的改良，敏感性和特異性與UDRL相似。本試驗(yàn)所用抗原是非特異的，檢測的抗體時(shí)應(yīng)排除假陽性反應(yīng)，結(jié)合病史，臨床表現(xiàn)及多次的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。 （1）熒光密螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA～ABS）：為間接熒光抗體法，其敏感性及特異性均高，常用于梅毒的早期診斷。用活梅毒螺旋體（Nichol株）加病人新鮮血清，35℃培養(yǎng)16小時(shí)，同法作正常血清對(duì)照，然后用暗視野顯微鏡觀察活動(dòng)的螺旋體數(shù)目，如試驗(yàn)標(biāo)本活動(dòng)的螺旋體數(shù)目小于或等于對(duì)照血清標(biāo)本內(nèi)的40%，即為陽性。皮膚受損、串病都會(huì)增加感染的危險(xiǎn)性。⑵ 進(jìn)實(shí)驗(yàn)室前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。如果接觸物傳染危險(xiǎn)性大，則應(yīng)戴雙層手套和防護(hù)眼鏡。⑸ 嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化妝。⑺ 離心：離心管套底墊要完好，使用匹配的管、套、離心頭，加蓋，離心時(shí)要戴好防護(hù)眼鏡。含有測試樣品的包裹應(yīng)在安全柜或其他適當(dāng)?shù)难b置內(nèi)打開。 消毒方法⑴ 廢棄物缸：10%（V/V）次氯酸鈉（含10，000ppm有效氯）。⑶ 溢出物：10%次氯酸鈉（V/V）。檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件第七章 SARS冠狀病毒的生物危害評(píng)估報(bào)告世界衛(wèi)生組織宣布SARS是冠狀病毒的一個(gè)變種，是引起非典型性肺炎的病原體。病毒粒子外包著脂肪膜，膜表面有三種糖蛋白：刺突糖蛋白（S，Spike Protein，是受體結(jié)合位點(diǎn)、溶細(xì)胞作用和主要抗原位點(diǎn)）；小包膜糖蛋白（E，Envelope Protein，較小，與包膜結(jié)合的蛋白）；膜糖蛋白（M，Membrane Protein，負(fù)責(zé)營養(yǎng)物質(zhì)的跨膜運(yùn)輸、新生病毒出芽釋放與病毒外包膜的形成）。冠狀病毒的核酸為非節(jié)段單鏈（＋）RNA，長2731kd，是RNA病毒中最長的RNA核酸鏈，具有正鏈RNA特有的重要結(jié)構(gòu)特征：即RNA鏈5’端有甲基化“帽子”，3’端有PolyA “尾巴”結(jié)構(gòu)。冠狀病毒的RNA和RNA之間重組率非常高，病毒出現(xiàn)變異正是由于這種高重組率。而抗原性發(fā)生變化的結(jié)果是導(dǎo)致原有疫苗失效，免疫失敗。再利用這個(gè)酶完成負(fù)鏈亞基因組RNA（subgenomic RNA）的轉(zhuǎn)錄合成、各種結(jié)構(gòu)蛋白mRNA的合成，以及病毒基因組RNA的復(fù)制。結(jié)構(gòu)蛋白和基因組RNA復(fù)制完成后，將在宿主細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)處裝配（assembly）生成新的冠狀病毒顆粒，并通過高爾基體分泌至細(xì)胞外，完成其生命周期。 　　到目前為止，大約有15種不同冠狀病毒株被發(fā)現(xiàn)，能夠感染多種哺乳動(dòng)物和鳥類，有些可使人發(fā)病。該病毒對(duì)溫度很敏感，在33℃時(shí)生長良好，但35℃就使之受到抑制。冠狀病毒是成人普通感冒的主要病原之一，兒童感染率較高，主要是上呼吸道感染，一般很少波及下呼吸道。 　　病毒的生長多位于上皮細(xì)胞內(nèi)，也可以感染肝臟、腎、心臟和眼睛，在另外的一些細(xì)胞類型（例如巨噬細(xì)胞）中也能生長。動(dòng)物疾病模型主要用于實(shí)驗(yàn)生理學(xué)、實(shí)驗(yàn)病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)治療學(xué)（包括新藥篩選）研究），因此對(duì)冠狀病毒的分離工作難度很大，需用人肝臟細(xì)胞、氣管及鼻黏膜細(xì)胞，經(jīng)器官培養(yǎng)才能分離得到。 　　冠狀病毒的血清型和抗原變異性還不明確。 傳播途徑冠狀病毒通過呼吸道分泌物排出體外，經(jīng)口液、噴嚏、接觸傳染，并通過空氣飛沫傳播，感染高峰在秋冬和早春。預(yù)防及安全措施 對(duì)其預(yù)防有特異性預(yù)防，即針對(duì)性預(yù)防措施（疫苗，疫苗的研制是有可能的，但需要時(shí)間較長，解決病毒繁殖問題是其難題）和非特異性預(yù)防措施（即預(yù)防春季呼吸道傳染疾病的措施，如保暖、洗手、通風(fēng)、勿過度疲勞及勿接觸病人，少去人多的公共場所等）。⑵加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)。⑷抗體檢測用血清標(biāo)本可先以56℃30分鐘處理。流行性乙型腦炎的病原體。低溫條件下，能自下而上較長時(shí)間，在動(dòng)物、雞胚及組織培養(yǎng)細(xì)胞中均能增殖。當(dāng)人受帶病毒的蚊子叮咬后，乙腦病毒進(jìn)入人體，在血管內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴結(jié)、肝、脾等吞噬細(xì)胞內(nèi)增殖，并經(jīng)血液循環(huán)到達(dá)腦部而引起炎癥。重癥者可周身高燒、抽痙不止、腦水腫、呼吸或循環(huán)衰竭而死亡。消滅蚊子孳生地，并撲滅越冬蚊和新生成蚊是預(yù)防乙腦的關(guān)鍵。人體接種疫苗可提高對(duì)乙腦病毒感染的抵抗力，對(duì)預(yù)防乙腦也有良好效果。早期住院、中西醫(yī)結(jié)合治療，可以大大提高治愈率，減少后遺癥。1950年以來，我國對(duì)該病進(jìn)行了大量病原學(xué)和流行病學(xué)研究，為了與甲型腦炎相區(qū)別，定名為流行性乙型腦炎，簡稱乙腦，是我國夏秋季流行的主要傳染病之一，除新疆、西藏、青海外，全國各地均有病例發(fā)生，病死率10%，大約15%的患者留有不同程度的后遺癥。病毒基因組為單股正鏈RNA，全長11kb，自5′至3′端依次編碼結(jié)構(gòu)蛋白C、M、E以及非結(jié)構(gòu)蛋白NS1—NS5，病毒RNA在細(xì)胞漿內(nèi)直接起mRNA作用，翻譯出結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白，在胞漿粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)裝配成熟，出芽釋放。　　BHK細(xì)胞系、C6/36細(xì)胞系及雞胚成纖維細(xì)胞是常用的敏感細(xì)胞，病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖引起細(xì)胞圓縮、顆粒增多、細(xì)胞脫落等CPE。細(xì)胞培養(yǎng)增殖病毒簡便易行，已取代動(dòng)物培養(yǎng)用物制備疫苗、診斷抗原，以及研究病毒復(fù)制機(jī)理、篩選抗病毒藥物等。E糖蛋白上有中和抗原表位和血凝抗原表位，可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件和血凝抑制抗體，在感染與免疫中重要作用。不同特異性單克隆抗體已用于研究乙腦病毒抗原結(jié)構(gòu)與功能以及鑒定新分離的毒株，解決了常規(guī)免疫血清特異性低的問題。病毒血凝素與紅細(xì)胞結(jié)合是不可逆的，但這種病毒與紅細(xì)胞形成的復(fù)合物仍有感染性，加入特異性抗體可抑制這種血凝現(xiàn)象。若將感染病毒的腦組織加入50%甘油緩沖鹽水中貯存在4℃，其病毒活力可維持?jǐn)?shù)月。在酸性條件下不穩(wěn)定，～。蚊感染病毒后，中腸細(xì)胞為最初復(fù)制部位，經(jīng)病毒血癥侵犯唾液腺和神經(jīng)組織，并再次復(fù)制，終身帶毒并可經(jīng)卵傳代，成為傳播媒介和貯存宿主。在溫帶，鳥類是自然界中的重要貯存宿主。有關(guān)病毒越冬的方式可為：①越冬蚊再感染鳥類，建立新的鳥—蚊—鳥循環(huán)；②病毒可在鳥、哺乳動(dòng)物、節(jié)肢動(dòng)物體潛伏越冬?！　〖倚蠛图仪菰诹餍屑竟?jié)感染乙腦病毒，一般為隱性感染，但病毒在其體內(nèi)可增殖，侵入血流，引起短暫的病毒血癥，成為乙腦病毒的暫時(shí)貯存宿主，經(jīng)蚊叮咬反復(fù)傳播，成為人類的傳染源?！　‘?dāng)帶毒雌蚊叮咬人時(shí)，病毒隨蚊蟲唾液傳入人體皮下。約經(jīng)4～7日潛伏期后，在體內(nèi)增殖的大量病毒，再侵入血流成為第二次病毒血癥，引起發(fā)熱、寒戰(zhàn)及全身不適等癥狀，若不再繼續(xù)發(fā)展者，即成為頓挫感染，數(shù)日后可自愈；但少數(shù)患者(%)體內(nèi)的病毒可通過血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)增殖,引起腦膜及腦組織發(fā)炎,造成神經(jīng)元細(xì)胞變性壞死、毛細(xì)血管栓塞、淋巴細(xì)胞浸潤，甚至出現(xiàn)局灶性壞死和腦組織軟化。重癥患者可能死于檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件呼吸循環(huán)衰竭，部分患者病后遺留失語、強(qiáng)直性痙攣、精神失常等后遺癥。流行區(qū)成人大多數(shù)都有一定免疫力，多為隱性感染，10歲以下兒童及非流行區(qū)成人缺乏免疫力，感染后容易發(fā)病。補(bǔ)體給合抗體在發(fā)病2～3周后方可檢出，約存在半年。流行區(qū)人群每年不斷受到帶病毒的蚊叮咬，逐漸增強(qiáng)免疫力，抗體陽性率常隨年齡而增高，例如北京市20歲以上成年人90%血清中含有中和抗體?！　∪?、微生物學(xué)診斷　　乙腦早期快速診斷通常采集性期患者血清或腦脊液特異性lgM ，也可做RT—PCR檢測標(biāo)本中的病毒核酸片段，一般6個(gè)小時(shí)內(nèi)可初步報(bào)告結(jié)果。由于乙腦患者病毒血癥期短，直接檢出病毒抗原或分離病毒陽性率低，較少用于診斷試驗(yàn)。可使用：① lgM 捕捉ELISA法(見23章)； ②2ME—NI法，血凝抑制抗體存在于lgM及l(fā)gG中，將早期單份血清分成二份，一份用2巰基乙醇(2ME)處理，以破壞lgM ，另一份不處理，然后同時(shí)做HI試驗(yàn)，若處理血清抗體滴度比未處理的下降≥4倍，則為lgM 陽性； ③微量間接免疫熒光法，用熒光素標(biāo)記的抗u鏈血清，檢測已與細(xì)胞抗原片結(jié)合的lgM，根據(jù)特異性熒光顆粒，判斷血清標(biāo)本中的lgM存在。常用于病毒的初步鑒定，確定有無乙腦病毒存在?！　?補(bǔ)體結(jié)合抗體僅存在于lgG 中，病后出現(xiàn)遲，消失快，適用于診斷近期感染。中和試驗(yàn)特異性和敏感性都高，但操作繁雜，需用大量動(dòng)物或組織培養(yǎng)管，需時(shí)較久，不適于臨床診斷常規(guī)使用，而在血清學(xué)流行病學(xué)調(diào)查和病毒鑒定上有價(jià)值。也可接種敏感細(xì)胞(如C6/36細(xì)胞系)分離病毒。我國已篩選出乙腦病毒減毒株，用地鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)制成減毒活疫苗，只需皮下注射一次，安全有效，目前正作現(xiàn)場觀察。流行區(qū)當(dāng)年飼養(yǎng)的仔豬接種乙腦疫苗，以杜絕傳染來源，也可使豬健康成長。　　(二)特異治療　　目前乙腦治療仍采用對(duì)癥處理及支持療法，有報(bào)道用病毒唑、干擾素、恢復(fù)期血清等治療，可能減輕病勢，但已出現(xiàn)腦炎癥狀者，則無治療效果。第二節(jié) 森林腦炎病毒　　森林腦炎病毒（簡稱森腦病毒）由蜱傳播，在春夏季節(jié)流行于俄羅斯及我國東北森林地帶，故稱蘇聯(lián)春夏腦炎病毒（Russian springsummer encephalitis virus）?！　∩帜X炎病毒呈球形,直徑為30~40nm，衣殼二十面體對(duì)稱外有包膜，含血凝素糖蛋白，可能為同一病毒的兩個(gè)亞型。接種猴腦內(nèi)，可致四肢麻痹。　　本病毒儲(chǔ)存宿主蝙蝠，及哺乳動(dòng)物（刺猬、松鼠、野兔等），這些野生動(dòng)物受染后為輕癥感染或隱性感染，但病毒血癥期限有長有短，如刺猬約23天。當(dāng)蜱叮咬感染的野生動(dòng)物，吸血后病毒侵入蜱體內(nèi)增殖，在其生活周期的各階段，包括幼蟲、稚蟲、成蟲及卵都能攜帶本病毒，并可經(jīng)卵傳代。　　本病毒的致病性與乙腦病毒相同，非疫區(qū)易感人被帶有病毒的蜱叮咬后，易感染發(fā)病，另外因喝生羊奶（羊感染時(shí)奶中有病毒或被蜱類污染）而被傳染，約經(jīng)8～14天潛伏期后發(fā)生腦炎，出現(xiàn)肌肉麻痹、萎縮、昏迷致死，少數(shù)痊愈者也常遺留肌肉麻痹。居住在森林疫區(qū)的人，因受少量病毒的隱性感染，血中有中和抗體，對(duì)病毒有免疫力。　　分離病毒及血清學(xué)檢驗(yàn)方法與乙腦相同?！　☆A(yù)防此病，可給去森林疫區(qū)的人接種滅活疫苗，效果良好。此外，應(yīng)穿著防護(hù)衣襪，皮膚涂擦鄰苯二甲酸酯（Orthophenyldimethylphthalate）,以防被蜱叮咬。淋病雙球菌呈腎形，兩個(gè)凹面相對(duì)，大小一致。常存在多核白細(xì)胞內(nèi)，橢圓或球形，常成雙排列，無鞭毛、無莢膜、不形成芽孢，對(duì)外界理化條件的抵抗力差，最怕干燥，在干燥環(huán)境中12 小時(shí)即可死亡。對(duì)各種化學(xué)消毒劑的抵抗力也很弱。24小時(shí)以后癥狀加劇，紅腫發(fā)展到整個(gè)YJ頭及部分尿道，分泌物由稀薄轉(zhuǎn)變?yōu)樯铧S色的膿液，出現(xiàn)尿頻、尿痛、排尿困難、行動(dòng)不便，入晚YJ常有痛性勃起。兩側(cè)腹股溝淋巴結(jié)亦可受到感染而引起紅腫疼痛，甚至化膿。最常見的感染部位為宮頸、尿道、尿道旁腺、子宮內(nèi)膜及輸卵管。1020%婦女伴有盆腔炎、繼發(fā)不育或?qū)m外孕等婦科疾病?！　D女陰道炎 由于小孩陰道是由柱狀上皮所包圍，極易被淋病雙球菌感染，會(huì)陰部紅腫，陰道及尿道有綠色分泌物，排尿疼痛，有時(shí)累及肛門。因此淋病孕婦的新生兒應(yīng)該用硝酸銀滴眼預(yù)防。男性淋病少部分是由性交接觸引起的，女性淋病也可由性交直接感染，也可由其他方式感染。也可通過被患者分泌物污染的衣服、被褥、便盆、醫(yī)療器械而間接傳染，特別是幼女常通過間接途徑而被感染；新生兒可通過患淋病孕婦的產(chǎn)道而被感染，引起淋菌性結(jié)膜炎。檢驗(yàn)科質(zhì)量管理體系文件　　2．非性接觸傳染（間接傳染）：此種情況也較多，主要是接觸病人含淋病雙球菌的分泌物或被污染的用具，如沾有分泌物的毛巾、腳布腳盆、衣被，甚至于廁所的馬桶圈等均可傳染，特別是女性（包括幼女），因其尿道和生殖道短，很易感染?！　〕扇颂貏e是男性淋病20%30%屬于性交傳染。調(diào)查資料表明，在淋病患者中男女一次性交感染率為22%35%；男女雙方感染率是男性易于傳染給女性。男性與女性病人性交感染率平均為19%25%，2次為35%，3次為49%，4次為57%。感染后淋菌侵入男性前尿道、女性尿道及宮頸等處，由于其表面的菌毛含有粘附因子，因而粘附到柱狀上皮細(xì)胞的表面進(jìn)行繁殖，并沿生殖道上行，通過柱狀上皮細(xì)胞的吞噬作用而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)繁殖，導(dǎo)致細(xì)胞溶解破裂，淋球菌遂被排至細(xì)胞外的粘膜下層。當(dāng)細(xì)菌進(jìn)入尿道腺體和隱窩后，腺管開口及隱窩被阻塞，潛藏的細(xì)菌成為慢性淋病的主要病灶。涂片對(duì)有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者，此法陽性率在90%左右，可以初步診斷。慢性淋病由于分泌物中淋球菌較少，陽性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高檢出率。另外對(duì)癥狀不典型的涂片陽性應(yīng)作進(jìn)一步檢查。目前國外推薦選擇培養(yǎng)基有改良的ThayerMartin（TM）培養(yǎng)基和New York City（NYC）培養(yǎng)基。在36℃，70%濕度，含5%10%CO2（燭缸）環(huán)境中培養(yǎng)，2448小時(shí)觀察結(jié)果。培養(yǎng)陽性率男性80%95%，女性8090%?！　?．直接免疫熒光試驗(yàn)：通過檢測淋球菌外膜蛋白I的單克隆抗體作直接免疫熒光試驗(yàn)?！　。ㄋ模┗蛟\斷　　1．淋球菌的基因探針診斷 淋球菌的基因