[自然科學(xué)]免疫學(xué)試驗技術(shù)-文庫吧
2025-02-05 05:20 本頁面
【正文】 合的特性，通過標(biāo)記物的檢測，從而確定抗原的存在部位。 標(biāo)記抗體 技術(shù) = 抗原抗體反應(yīng) 示蹤物標(biāo)記 靈敏性 特異性 免疫標(biāo)記技術(shù)的主要特點： 高特異性 、 高靈敏性 免疫技術(shù) +標(biāo)記技術(shù) 常用的免疫標(biāo)記物質(zhì) 類別 標(biāo)記物 用途 熒光素 FITC、 RB200等 免疫組化 免疫分析測定 酶 HRP、 AP 免疫組化 免疫分析測定 金屬顆粒 膠體金、鐵蛋白 免疫組化 免疫分析測定 放射性核素 3H、 14C、 32P、 57Gr、 125I、 131I 免疫分析測定 熒光抗體 ? ： 熒光素在紫外線照射下可發(fā)出肉眼可見的熒光，其與抗體結(jié)合后仍保持其本身的特性。 ? 熒光抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，（ 1）通過熒光顯微鏡觀察可測知抗原的存在及部位； （ 2）依熒光強弱也可測知抗原量的差異。 熒光抗體的標(biāo)記 ? （１）免疫球蛋白（ IgG ）的提取： 硫酸銨鹽析法、 DEAE纖維素提取法。 ? （２）熒光抗體的標(biāo)記： 標(biāo)記 Ab常用的熒光素有 異硫氰酸熒光素 （ FITC，為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，最大吸收光波長為 490495nm，最大發(fā)射光波長 520530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光 ）和 四乙基羅丹明 （ RB200，為橘紅色粉末，最大吸收光波長為 570nm，最大發(fā)射光波長為 595－ 600nm，呈橘紅色熒光 ）。 ? FITC的標(biāo)記如下： ? ① 濃縮后的 IgG、定量、稀釋（ 10~20mg/ml） . ? ② FITC按蛋白量的 1/80－ 1/100加入。應(yīng)用 FITC進行溶解。 ? ③ IgG稀釋液與 FITC溶液按１０ :1配合， FITC液緩慢地加入到 IgG稀釋液中，防止出泡。 ? ④避光以電磁攪拌器攪拌，其反應(yīng)時間與溫度有關(guān)。 2－ 4℃ 須 6h 20－ 25℃ 須 1－ 2h即可。 一般以低溫標(biāo)記為最好。 ⑤ 應(yīng)用透析法、鹽析、凝膠過濾法除去未結(jié)合的游離熒光素。 ? 應(yīng)用 主要用于檢測抗原 （定性、定位） 特點：敏感，需熒光 顯微鏡 直接法： 病料（ Ag） 涂片（切片） FAbAg 鏡檢 間接法： 病料（ Ag） 涂片 AgAb1 Ag Ab1Ab2 F 鏡檢 FAb Ab1 Ab2F 直接法 檢測一種抗原就須標(biāo)記一種特異性的 AbF ，較特異 間接法 標(biāo)記一種動物的免疫球蛋白 AbF，就能檢測多種抗原，較敏感 ? 直接法 ? 制片： ? 待檢病理組織做成冰凍切片或觸片，細菌材料可做成涂片，在室溫中自然干燥，病毒抗原通常用冷丙酮固定 l5min，細菌抗原則用加熱固定即可。 ? 染色： ? 滴加熒光抗體，置 37℃ 染色 30～ 60min，用磷酸緩沖鹽水 (PBS)充分洗滌以除去未結(jié)合的熒光抗體，加 1滴，用蓋玻片封固。 ? 鏡檢： ? 在熒光顯微鏡下進行檢查，抗原所在部位呈黃綠色熒光。 ? 設(shè)對照： ? 進行直接熒光染色時，應(yīng)設(shè)以下對照： ? （ 1）用熒光抗體染正
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