【正文】 料是由基質(zhì)和功能層兩部分構(gòu)成。 基質(zhì)： 又常稱作載體或擔(dān)體，通常制備成數(shù)微米至數(shù)十微米粒徑的球形顆粒，它具有一定的剛性，能承受一定的壓力，對(duì)分離不起明顯的作用，只是作為功能基團(tuán)的載體。常用來(lái)作基質(zhì)的有硅膠和有機(jī)高分子聚合物微球。 功能層： 是通過(guò)化學(xué)或物理的方法固定在基質(zhì)表面的、對(duì)樣品分子的保留起實(shí)質(zhì)作用的有機(jī)分子或功能團(tuán)。填料的物理結(jié)構(gòu)： 分為微孔型（或凝膠型）、大孔型（全多孔型）、薄殼型和表面多孔型四種類型。 四、檢測(cè)器 檢測(cè)器是液相色譜儀的三大關(guān)鍵部件之一。對(duì)檢測(cè)器的要求是，靈敏度高、重復(fù)性好、線性范圍寬、死體積小以及對(duì)溫度和流量的變化不敏感等。 檢測(cè)器的分類 在液相色譜中，有兩種類型的檢測(cè)器，一類是 溶質(zhì)性檢測(cè)器 ，它僅對(duì)被分離組分的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)。屬于這類的檢測(cè)器有紫外、熒光、電化學(xué)檢測(cè)器等。另一類是 總體檢測(cè)器 ，它對(duì)試樣和洗脫液總的物理或化學(xué)性質(zhì)有響應(yīng)。屬于這類的檢測(cè)器有示差折光檢測(cè)器等。 紫外 可見(jiàn)光檢測(cè)器 原理： 基于 LambertBeer定律，即被測(cè)組分對(duì)紫外光或可見(jiàn)光具有吸收，且吸收強(qiáng)度與組分濃度成正比。 UVVIS檢測(cè)器既有較高的靈敏度，也有很廣泛的應(yīng)用范圍。由于 UVVIS對(duì)環(huán)境溫度、流速、流動(dòng)相組成等的變化不是很敏感，所以還能用于梯度淋洗。 用 UVVIS檢測(cè)時(shí)，為了得到高的靈敏度，常選擇被測(cè)物質(zhì)能產(chǎn)生最大吸收的波長(zhǎng)作檢測(cè)波長(zhǎng)。 二極管陣列檢測(cè)器 以光電二極管陣列（作為檢測(cè)元件的 UVVIS檢測(cè)器。它可構(gòu)成多通道并行工作，同時(shí)檢測(cè)由光柵分光，再入射到陣列式接受器上的全部波長(zhǎng)的信號(hào)，然后，對(duì)二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到的是時(shí)間、光強(qiáng)度和波長(zhǎng)的三維譜圖。與普通 UVVIS檢測(cè)器不同的是，普通 UVVIS檢測(cè)器是先用單色器分光，只讓特定波長(zhǎng)的光進(jìn)入流動(dòng)池。而二極管陣列 UVVIS檢測(cè)器是先讓所有波長(zhǎng)的光都通過(guò)流動(dòng)池，然后通過(guò)一系列分光技術(shù)，使所有波長(zhǎng)的光在接受器上被檢測(cè)。 直接紫外檢測(cè) ： 所使用的流動(dòng)相為在檢測(cè)波長(zhǎng)下無(wú)紫外吸收的溶劑，檢測(cè)器直接測(cè)定被測(cè)組分的紫外吸收強(qiáng)度。 間接紫外檢測(cè) ： 使用具有紫外吸收的溶液作流動(dòng)相，間接檢測(cè)無(wú)紫外吸收的組分。 柱后衍生化光度檢測(cè) ： 對(duì)于那些可以與顯色劑反應(yīng)生成有色配合物的組分，可以在組分從色譜柱中洗脫出來(lái)之后與合適的顯色劑反應(yīng)，在可見(jiàn)光區(qū)檢測(cè)生成的有色配合物。 示差折光檢測(cè)器 原理：基于樣品組分的折射率與流動(dòng)相溶劑折射率有差異，當(dāng)組分洗脫出來(lái)時(shí)，會(huì)引起流動(dòng)相折射率的變化，這種變化與樣品組分的濃度成正比。 絕大多數(shù)物質(zhì)的折射率與流動(dòng)相都有差異，所以 RI是一種通用的檢測(cè)方法。雖然其靈敏度比其他檢測(cè)方法相比要低 13個(gè)數(shù)量級(jí)。對(duì)于那些無(wú)紫外吸收的有機(jī)物（如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴）是比較適合的。在凝膠色譜中是必備檢測(cè)器，在制備色譜中也經(jīng)常使用。 熒光檢測(cè)器 原理： 許多有機(jī)化合物，特別是芳香族化合物、生化物質(zhì)，被一定強(qiáng)度和波長(zhǎng)的紫外光照射后，發(fā)射出較激發(fā)光波長(zhǎng)要長(zhǎng)的熒光。熒光強(qiáng)度與激發(fā)光強(qiáng)度、量子效率和樣品濃度成正比。有的有機(jī)化合物雖然本身不產(chǎn)生熒光，但可以與發(fā)熒光物質(zhì)反應(yīng)衍生化后檢測(cè)。 特點(diǎn)： 有非常高的靈敏度和良好的選擇性，靈敏度要比紫外檢測(cè)法高 23個(gè)數(shù)量級(jí)。而且所需樣品量很小，特別適合于藥物和生物化學(xué)樣品的分析。 電導(dǎo)檢測(cè)器（ conductivity detector, CD） 原理： 基于離子性物質(zhì)的溶液具有導(dǎo)電性，其電導(dǎo)率與離子的性質(zhì)和濃度相關(guān)。 電導(dǎo)檢測(cè)器是離子色譜中必備的檢測(cè)器。 電導(dǎo)池是其核心。 電導(dǎo)池的結(jié)構(gòu)： 檢測(cè)體積可達(dá)到微升甚至納升級(jí)?；窘Y(jié)構(gòu)是在柱流出液中放置兩根電極，然后通過(guò)適當(dāng)?shù)碾娮泳€路測(cè)量溶液的電導(dǎo)。 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 基于溶質(zhì)的光散射性質(zhì)的檢測(cè)器。由霧化器、加熱漂移管、激光光源和光檢測(cè)器等部件構(gòu)成。因?yàn)樯⑸涔鈴?qiáng)只與溶質(zhì)顆粒大小和數(shù)量有關(guān)，而與溶質(zhì)本身的物理和化學(xué)性質(zhì)無(wú)關(guān)，所以ELSD屬通用型和質(zhì)量型檢測(cè)器。適合于無(wú)紫外吸收、無(wú)電活性和不發(fā)熒光的樣品的檢測(cè)。其靈敏度與載氣流速、汽化室溫度和激光光源強(qiáng)度等參數(shù)有關(guān)。與示差折光檢測(cè)器相比，它的基線漂移不受溫度影響，信噪比高，也可用于梯度洗脫。 三、 影響分離的因素 在高效液相色譜中 , 速率方程中的分子擴(kuò)散項(xiàng) B/U較小 ， 可以忽略不計(jì) ， 而只有兩項(xiàng) ， 即： H = A + C u 故高效液相色譜 Hu曲線與氣相色譜的形狀不同 ，如圖所示： 影響分離的主要因素有流動(dòng)相的流量、性質(zhì)和極性。 1. 影響分離的因素 —— 流速 流速大于 cm/s時(shí) , H～ u曲線是一段斜率不大的直線。降低流速，柱效提高不是很大。但在實(shí)際操作中，流量仍是一個(gè)調(diào)整分離度和出峰時(shí)間的重要可選擇參數(shù)。 2. 固定相及分離柱 氣相色譜中的固定液原則上都可以用于液相色譜，其選用原則與氣相色譜一樣。 選擇合適的固定相，降低填料粒度可顯著提高柱效，但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項(xiàng)技術(shù)要求非常高的工作，一般很少自行制備。 選擇短柱、細(xì)內(nèi)徑提高分析速度； 研制高效柱填料是一活躍領(lǐng)域。 液相色譜流動(dòng)相 （ 1）能溶解樣品，但不能與樣品發(fā)生反應(yīng)。 （ 2）與固定相不互溶，而使柱效下降或損壞柱子。也不發(fā)生不可逆反應(yīng)。 （ 3）粘度要盡可能小，這樣才能有較高的滲透性和柱效（ 4）應(yīng)與所用檢測(cè)器相匹配。例如利用紫外檢測(cè)器時(shí)，溶劑要不吸收紫外光。 （ 5）容易精制、純化、毒性小，不易著火、價(jià)格盡量便宜等。 3. 流動(dòng)相及流動(dòng)相的極性 （ 1） 可顯著改變組分分離狀況的流動(dòng)相選擇在液相色譜中顯得特別重要 。 液相色譜的流動(dòng)相又稱為：淋洗液 ， 洗