色譜分析（中國藥科大學(xué)） 第5章 現(xiàn)代色譜技術(shù)簡介-文庫吧
2024-12-22 23:17 本頁面
【正文】 ① 可一次完成陽離子、陰離子、中性粒子的分離； ② 改變電滲流的大小和方向可改變分離效率和選擇性； ③ 電滲流的微小變化影響結(jié)果的重現(xiàn)性。 HPCE 中影響電滲流的因素 (1) 電場強度的影響 電滲流速度和電場強度成正比，當(dāng)毛細管長度一定時，電滲流速度正比于工作電壓。 (2) 毛細管材料的影響 不同材料毛細管的表面電荷特 性不同，產(chǎn)生的電滲流大小不同； (3) 電解質(zhì)溶液性質(zhì)的影響 對于石英毛細管，溶液 pH 增高時，表面電離多，電荷密度增加，管壁 zeta 電勢增大，電滲流增大， pH=7，達到最大； pH3，完全被氫離子中和，表面電中性，電滲流為零。分析時，采用緩沖溶液來保持 pH 穩(wěn)定。緩沖溶液離子強度增加，電滲流下降。 (4) 溫度的影響 毛細管內(nèi)溫度的升高，使溶液的黏度下降，電滲流增大。 (5) 添加劑的影響 ① 加入濃度較大的中性鹽（如 K2SO4），溶液離子強度增大，使溶液的黏度增大，電滲流減?。? ② 加入表面活性劑，可改變電滲流的大小和方向，如加入陰離子表 面活性劑，如十二烷基硫酸鈉（ SDS），電滲流增大； ③ 加入有機溶劑如甲醇、乙腈，使電滲流增大。 三、 HPCE 中的參數(shù) 遷移時間（保留時間） 分離效率（塔板數(shù)） 分離度 四、 影響分離效率的因素 —— 區(qū)帶展寬 (1) 縱向擴散的影響 在 HPCE 中，縱向擴散引起的峰展寬。由擴散系數(shù)和遷移時間決定。大分子的擴散系數(shù)小，可獲得更高的分離效率 —— 大分子生物試樣分離的依據(jù)。 (2) 進樣的影響 當(dāng)進樣塞長度太大時，引起的峰展寬大于縱向擴散，分離效率明顯下降。 (3) 焦耳熱與溫度梯度的影響 散熱過程中，在毛細管內(nèi)形成溫度梯度（中心溫度高），破壞了塞流， 導(dǎo)致區(qū)帶展寬。 改善方法：減小毛細管內(nèi)徑；控制散熱。 (4) 溶質(zhì)與管壁間的相互作用 存在吸附與疏水作用，造成譜帶展寬。 細內(nèi)徑毛細管柱，一方面有利于散熱，另一方面比表面積大，又增加了溶質(zhì)吸附的機會。 改善方法：加入兩性離子代替強電解質(zhì)，兩性離子一端帶正電，另一端帶負電，帶正電一端與管壁負電中心作用，濃度約為溶質(zhì)的 1001000 倍時，抑制對蛋白質(zhì)吸附，又不增加溶液電導(dǎo)，對電滲流影響不大。 (5) 其他影響因素 電分散作用及“層流”現(xiàn)象。 五、 高效毛細管電泳的分離模式 毛細管區(qū)帶電泳 （ capillary zone electrophoresis ， CZE） 最基本、應(yīng)用廣的分離模式 電粒子的遷移速度 =電泳和電滲流速度的矢量和。 正離子：
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