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阿司匹林聯(lián)合氯吡格雷抑制兔動(dòng)脈粥樣硬化-畢業(yè)論-文庫(kù)吧

2025-05-18 11:55 本頁(yè)面


【正文】 lesterol and triglyceride levels,thereby reducing the symptoms of atherosclerosis in rabbits .Reduce macrophage percentage of positive cells ,while the bination of the two drugs inhibit atherosclerosis inceased significantly(P).There was no significant difference between the two drugs( P) .The experimental results show that the bination of aspirin and clopidogrel has a good effect on inhibiting atherosclerosisi in rabbits. Key words:aspirin、 clopidogrel、 atherosclerosis 5 冠狀動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化時(shí),斑塊組織破裂,膠原蛋白流出,血小板被激活而聚集粘黏,進(jìn)而形成血栓 [1]。阿司匹林和氯吡格雷是臨床上常見(jiàn)的抗血小板藥物,是治療缺血性腦卒的常用治療藥物[2]。氯吡格雷作為急性冠脈綜合征支架術(shù)后重要藥物 ,可降低血管壁的厚度,減輕炎癥,降低心血管疾病 [3]。以往臨床上常常采用單藥如阿司匹林或者氯吡格雷等抗血小板藥物治療,有研究報(bào)道表明,阿司匹林與氯吡格雷聯(lián)合使用治療缺血性腦血管病比單劑使用某一抗血小板藥的療效要好 [4]。隨著研究的深入,采用兩種不同的抗血小板藥物聯(lián)合使用治療動(dòng)脈粥樣硬化病癥越來(lái)越受到研究者的關(guān)注[5]。本研究旨在研究阿司匹林與氯吡格雷聯(lián)用對(duì)抑制兔動(dòng)脈粥樣硬化的療效。 1 材料 膽固醇(上海晶純實(shí)業(yè)有限公司),甘油氯吡格雷(武漢大華偉業(yè)醫(yī)藥化工集團(tuán)),阿司匹林(無(wú)錫阿斯特拉公司),血脂測(cè)定試劑盒(上海名典生物工程公司),血清 C反應(yīng)蛋白( CRP)測(cè)定試劑盒( Sigma 公司),巨噬細(xì)胞單克隆抗體 RAM11( Denmark 公司),大鼠平滑肌肌動(dòng)蛋白單克隆抗體 1A4( sigma 公司),免疫組織化學(xué) Power VisionTMPV6002 試劑盒( Power Vision,USA) ,牛血清蛋白(中國(guó)科學(xué)院新疆化學(xué)所生化試劑廠)。 2 實(shí)驗(yàn)方法 動(dòng)物分組與建模 49只雄性新西蘭 白兔(約兩個(gè)月大,體重約 ,湖北中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),將兔子分為五組:( 1)空白對(duì)照組( 9 只),( 2)模型對(duì)照組( 10 只),( 3)阿司匹林組( 10 只, 12mg/(),( 4)氯吡格雷組( 10只, 4mg/())( 5)聯(lián)合用藥組( 10 只 ,氯吡格雷 4mg/()和阿司匹林12mg/())。注意:阿司匹林和氯吡格雷都通過(guò)灌胃給藥,第一組和第二組則用等量的蒸餾水灌胃。第一組喂養(yǎng)普通飼料,后四組每只兔子均用高膽固醇飼料 (基礎(chǔ)飼料 +3%甘油 +2%膽固醇 )喂養(yǎng),每只 100g 連續(xù)喂養(yǎng) 12 周。喂養(yǎng) 2天后,以 240mg/kg 靜脈注射 %的牛血清蛋白,每周一次,注射三次。每周測(cè)定一次體重,共測(cè)定 12 次。 血清血脂和 CRP 的含量測(cè)定 分別在實(shí)驗(yàn)前(第 0周)、處死動(dòng)物前(第 12 周)經(jīng)兔子耳緣靜脈腹腔取血。用酶學(xué)法分別測(cè)定血清總膽固醇( TC)、甘油三酯( TG)和高密度蛋白脂膽固醇( HDLC)的濃度。采用 Friedewald 公式 ”低密度脂蛋白膽固醇LDLC(mmol/L)=TCHDLCTG/” 從而算出 LDLC 的濃度。在第 20 周末,取靜脈血利用固相酶聯(lián)免疫吸附 法測(cè)定測(cè)定血清 CRP 含量。 6 病理形態(tài)學(xué)觀察 在 12 周末用氣體栓塞法處死兔子,并且在無(wú)菌條件下取出動(dòng)物的主動(dòng)脈,剝離主動(dòng)脈外模,用 10%甲醛溶液浸泡固定后用蘇丹 III 染色,用”天地病理、細(xì)胞圖像分析系統(tǒng) ()”測(cè)定斑塊面積和內(nèi)膜總面積,計(jì)算斑塊 /內(nèi)膜面積比。將動(dòng)脈粥樣硬化最明顯的部分用常規(guī)石蠟包埋,將主動(dòng)脈分為 5段,分別制成 5μ m切片,用蘇木素 伊紅( HE)和 Weigert 氏彈力 Van Gieson 氏( ET+VG)染色,用相同的圖像分析軟件測(cè)定內(nèi)膜厚度、中膜厚度,計(jì)算內(nèi)膜 /中膜厚度比。將最后兩段組主動(dòng)脈組織的數(shù)據(jù)算出平均值,每組隨機(jī)取兩個(gè)動(dòng)物主動(dòng)脈上端組織放入 6%的戊二醛溶液中固定,利用掃描和透視電鏡(日本)觀察主動(dòng)脈組織的超微結(jié)構(gòu)并判斷出結(jié)構(gòu)的改變。 免疫組織化學(xué)檢查 取主動(dòng)脈弓遠(yuǎn)端主動(dòng)脈 5mm 標(biāo)本連續(xù)切片,每個(gè)標(biāo)本取切片三張,總厚度為 4μ m,采用 EnVision 法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,蘇木精復(fù)染,中性樹(shù)膠封片。細(xì)胞類(lèi)型的鑒定用小鼠抗兔 巨噬細(xì)胞單克隆抗體( RAM11,稀釋度為 1:25),小鼠平滑肌肌動(dòng)蛋白 單克隆抗體( 1A4 稀釋度為 1:300),設(shè) PBS 代替一抗作為陰性對(duì)照,用抗 鼠 COX2多克隆抗體(稀釋度 1:400)來(lái)檢測(cè) COX2的表達(dá),棕黃色產(chǎn)物為陽(yáng)性染色。在 200 倍鏡下隨機(jī)取 46 個(gè)視野,采用天地病理、細(xì)胞圖像分析系統(tǒng) TD2021(),算出陽(yáng)性細(xì)胞百分率,重復(fù)操作兩次,最后結(jié)果取平均值。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 軟件包建立數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行分析,計(jì)量數(shù)據(jù)都以均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)差( ?x?s)表示,多組間比較用方差分析兩組間比較用 t 檢驗(yàn), P 為差異有顯著性意義。 3 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),去除死亡的動(dòng)物和其他原因后,每組動(dòng)物還有 9只 實(shí)驗(yàn)前后各組動(dòng)物血清 TC、 TG、 LDLC、 HDLC 水平變化( ?x?s)(表 1) 組別 TC TG HDLC LDLC 空白對(duì)照組 第 0周 ? ? ? ? 第 12周 ? ? ? ? 模型對(duì)照組 第 0周 ? ? ? ? 第 12周 ? ? ? ? 阿司匹林組 第 0周 ? ? ? ? 第 12周 ? ? ? ? 氯吡格雷組 第 0 周 ? ? ? ? 第 12周 ? ? ? ? 7 兩藥聯(lián)用組 第 0 周 ? ? ? ? 第 12 周 56? ? ? ? Q P
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