資料一核酸分離純化-文庫吧
2025-04-23 01:59 本頁面
【正文】 3 million 2333 操作時間： 1520分鐘 樣本 數(shù)量（ mg） DNA產(chǎn)量 (ug) DNA純度 Spleen(Mouse) 20 mg 2230 Kidney(Mouse) 30 mg 3040 Liver(Mouse) 30 mg 3040 細(xì)胞 組織 EzWay Genomic DNA Kit, Multi 原理： 同 Gspin Genomic DNA kit 特點(diǎn)： 試劑無毒性 缺點(diǎn)： 價格相對 IntRON貴 推薦： 細(xì)胞 /組織、血液、植物 /食品、細(xì)菌－ Gspin系列 酵母－ EzWay系列 病毒 DNA/RNA mix－ Gspin系列 基因組 DNA抽提常見問題分析 (一 ) Q洗滌后硅膠膜上有雜色殘留 細(xì)胞裂解不充分 , 裂解液和樣品要充分混勻 Q洗脫產(chǎn)物 DNA量很少或沒有 A、樣品中細(xì)胞或病毒濃度低 B、裂解液和樣品混合不均勻造成的細(xì)胞裂解不充分 C、蛋白酶 K活性下降造成的細(xì)胞裂解不充分 D、溫浴時間不夠造成的細(xì)胞裂解不充分或蛋白降解不完全，盡量把組織切成小塊，延長溫浴時間，使裂解物中沒有顆粒狀物殘留。 E、 DNA洗脫效率低，離心柱中加入洗脫液后室溫靜置至少 1 min，再離心 F、洗脫液 pH不對，低 pH值減少 DNA產(chǎn)率。確保洗脫液 pH值在 。 G、洗脫體積大，超過 200μl DNA濃度會降低，但 DNA總量不會減少 Q A260/A280 比值較低 用水作為洗脫液時，比值偏低 Q A260/A280 比值較高 大量 RNA殘留，沒有使用 RNase A，或 RNase A活性下降 Q DNA影響后續(xù)酶反應(yīng)實(shí)驗(yàn) A、在洗脫液中有殘留的漂洗液，可通過再次離心去除 B、大量 RNA殘留 基因組 DNA抽提常見問題分析 (二 ) 質(zhì)粒特性介紹： o 大腸桿菌染色體 DNA較質(zhì)粒DNA大得多 o 染色體 DNA為線性分子，而大多數(shù)質(zhì)粒 DNA是共價閉合的環(huán)狀分子 宿主菌（一般是大腸桿菌株） DNA與質(zhì)粒 DNA之間的兩種主要性質(zhì)差異： 二、質(zhì)粒 DNA抽提 小量抽提 GeneJET Plasmid Miniprep Kit（有現(xiàn)貨） 同下面產(chǎn)品類似，價格相對要貴 DNAspin Plasmid DNA Extraction Kit（價格更有優(yōu)勢） 所有后續(xù)分子生物學(xué)操作，包括轉(zhuǎn)染 EzWay Plasmid DNA Kit, Mini（價格太貴） 測序、體外轉(zhuǎn)錄與翻譯、酶切、轉(zhuǎn)化、文庫篩選 中量抽提 DNAmidi Plasmid DNA Extraction Kit 測序、轉(zhuǎn)染、體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 分離示意圖 分離原理 高鹽濃度情況下，硅石與DNA結(jié)合 低鹽濃度情況下，硅石與DNA分離 簡要流程 ? 結(jié)合 ? 洗滌 ? 洗脫 質(zhì)粒 DNA抽提常見問題分析 (一 ) Q未提出質(zhì)粒或質(zhì)粒得率較低 A、大腸桿菌老化：涂布平板，重新挑新菌落 B、質(zhì)?？截悢?shù)低：更換具相同功能的高拷貝載體 C、菌體中無質(zhì)粒：有些質(zhì)粒（ Cosmid）本身不穩(wěn)定，多次轉(zhuǎn)接后可能丟失 檢查抗生素使用濃度是否正確。 D、堿裂解不充分：菌液過多，菌體裂解不充分，可減少菌體用量或增加溶液用量。 低拷貝數(shù)質(zhì)粒，加倍使用溶液，有助于增加提取量和質(zhì)粒質(zhì)量。 E、吸附柱過載：不同吸附柱吸附能力不
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