sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量-文庫吧
2025-04-20 13:15 本頁面
【正文】 的 電荷狀態(tài) 形成僅保持原有分子大小 為特征的負離子團塊 ， 降低或消除了各種蛋白質(zhì)分子之間天然的電荷差異 ， 因此在進行電泳時 ， 蛋白質(zhì)分 子移速度取決于分子大小。當分子量在 15000KD到 202100KD之間時，蛋白質(zhì)的遷移率和分子量的對數(shù) 呈線性關(guān)系 。 合下式： ，式中 將已知分子量的 標準蛋白質(zhì)的遷移率對分子量對數(shù)作圖 ，可獲得一條標準曲線 ，未知蛋白質(zhì)在相同條件下進行電泳，根據(jù)它的電泳遷移率即可在標準曲線上求得分子量。 450 1圖 1 標準蛋白質(zhì)與待測樣品電泳圖譜 圖 2 電泳遷移率與 logMW之間的關(guān)系 94 000 62 000 43 000 31 000 20 100 14 400 膠槽 1 2 3 注：膠槽 1 標準蛋白；膠槽 3 樣品蛋白 得到同行專家贊 采用 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法測蛋白質(zhì)分子量時 ， 必須 完全打開蛋白質(zhì)之間的二硫鍵 ， 使蛋白質(zhì)分子被解聚 ， SDS才能定量地結(jié)合到亞基上 。因此在用 SDS處理樣品同時用 巰基乙醇處理 。 巰基乙醇是一種強還原劑 ， 它使被還原的二硫鍵不易再氧化 ， 從而使很多不溶性蛋白質(zhì)溶解而與 SDS定量結(jié)合 。 三、 實驗試劑和器材 材料 實驗試劑 : 兔磷酸化酶 B MW=97,400 牛血清白蛋白 MW=66,200 兔肌動蛋白 MW=43,000 牛碳酸酐酶 MW=31,000 胰蛋白酶抑制劑 MW=20,100 雞蛋清溶菌酶 MW=14,400
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