聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳-文庫吧
2025-04-22 21:19 本頁面
【正文】 ，室溫存放。 (3) 30% Acrylamide第一向儲液（ 100mL/班） 含 % (w/v) acrylamide和 % (w/v) N,N39。methylenebisacrylamide 用重蒸水先將 g bisacrylamide溶解后，再加入 g acrylamide，溶解，用重蒸水定容到 100 mL。如果溶液混濁，需要進行過濾。溶液存放在棕色瓶中， 4176。 C貯藏，3~4星期內(nèi)使用。 (4) 10%(w/v) NP40（ 20mL/班） 配制 100 mL溶液，稱量10 g NP40，用重蒸水定容到 100 mL，室溫存放。 (5) 20 mmol/L NaOH 配制 500 mL，稱 g NaOH用蒸餾水定容到 500 mL。 (6) 10 mmol/L H3PO4 配制 2021 mL，量取 mL H3PO4(85%)用蒸餾水定容到 2021 mL。 (7)固定液 乙醇 35mL，三氯乙酸 10 g，磺基水楊酸 g，加蒸餾水定容到 100 mL。 (8)脫色液 乙醇 25 mL，冰乙酸 10 mL，加蒸餾水定容到100 mL。 (9) 10%過硫酸銨 g過硫酸銨溶于 1mL重蒸水中，在4186。C冰箱中可保存 3~4個星期。 3．實驗步驟 (1)準備玻璃管 取 4支 18 cm的長玻璃管，洗凈晾干。 (2)配制第一向凝膠溶液（ 8mL /4組） 配制方法見表 1。 表 1 第一向凝膠溶液配方 尿素 g 重蒸水 mL 30% Acrylamide儲液 mL 攪拌溶解 10% NP40 mL 兩性電解質(zhì) (pH3~) mL 10% 過硫酸銨 * 15 181。L TEMED* 10 181。L (3)灌制第一向凝膠（每組 2人共制作 4根膠柱） 取 1支 1 mL注射器和一根長針頭，吸取約 膠溶液，再取 1支玻璃管，用手指墊一塊封口膜堵住玻璃管的一端，將長針頭全部插入玻璃管中，一邊注入凝膠溶液一邊后退針頭，注意針頭不要露出膠面 , 直至凝膠溶液到達玻璃管頂端，撤出針頭，用濾紙擦干玻璃管口的凝膠溶液，然后用封口膜封住該端管口，將玻璃管倒置，將長針頭從玻璃管的另一端插入管內(nèi)凝膠液面下，用同樣方法加入凝膠溶液至距管口 2cm處，將玻璃管垂直放置，然后立即用微量注射器在膠面上加少量重蒸水覆蓋，大約 30 min后凝膠聚合。 (4)加樣 待凝膠聚合后，用微量注射器吸去覆蓋在膠上的重蒸水。在每根膠柱上加 20~30 181。L蛋白質(zhì)樣品溶液，然后再加入覆蓋溶液至管口。 (5)安裝電泳槽 加樣后將玻璃管插入電泳槽的架子上，在上槽中玻璃管上端露出 1 cm，剝?nèi)ゲＡЧ芟露说姆饪谀ぃ瑴蕚潆娪?。在電泳槽的下槽?2021 mL 10
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